【摘要】： 細胞因子作用于相應(yīng)受體時的一個重要結(jié)果是誘導(dǎo)基因表達，細胞 膜上的受體接收特定的來自胞外的信號刺激后將這種信號傳至胞內(nèi)，產(chǎn) 生一系列新的信號分子和有序的系列化級聯(lián)反應(yīng)，最終對細胞乃至整個 生物體的生理功能產(chǎn)生影響。白細胞介素-6（IL-6）是一種多功能的細胞因 子。其作用于敏感細胞時，必將導(dǎo)致一些基因的表達，克隆這些基因， 必將有助于進一步闡明IL-6信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑及發(fā)現(xiàn)新的信號分子，同時也 將有助于進一步闡明IL-6與某些疾病的相關(guān)性。我們用cDNA-RDA法和 改進的DD-PCR法，分離了IL-6處理前后U937細胞差異表達的基因片段； 之后用電子克隆和RT-PCR技術(shù)克隆了一些新基因片段的全長cDNA序列； 并用生物信息學(xué)方法對新基因的結(jié)構(gòu)和功能預(yù)測；最后在原核系統(tǒng)對其 中的STRF8基因進行了表達和純化。 首先，分離了16個差異表達的基因序列，反向Northern雜交證實了 它們與IL-6的相關(guān)性。序列分析表明，其中7個差異表達的EST代表在 細胞生命活動或信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中有重要作用的已知基因，9個是與IL-6作用 相關(guān)的新基因片段。這9個新基因片段的GenBank接受號分別為： BE644245、BE644246、BE644248、BE644249、BE644250、BE761007、 BE761008，BE761009和BE761010。 利用dbEST庫的資源，對所獲得的新基因片段進行了電子延伸，獲得 了較長的cDNA序列；ORF分析后，對具有典型ORF結(jié)構(gòu)的全長cDNA序列， 用RT-PCR法進行了實驗驗證。結(jié)果有5個全長cDNA序列被克隆，分別 命名為STRF2、STRF6、STRF7、STRF8和STRF11。時間表達譜的分析 進一步證明了5個新基因與IL-6的相關(guān)性，Norhtern blot證實了STRF7 和STRF8在IL-6作用后的U937細胞中表達量升高。上述結(jié)果提示這些 新基因與IL-6作用相關(guān)。 用生物信息學(xué)方法對新基因的電子表達譜、染色體定位、相應(yīng)蛋白的 物理化學(xué)性質(zhì)進行了分析，并進行了結(jié)構(gòu)和功能預(yù)測。結(jié)果表明，STRFS 具有多個磷酸化位點，具有硫氧還蛋白家族的結(jié)構(gòu)功能域及硫氧還蛋白 的活性中心，在氨基酸水平上與鼠的硫氧還蛋白有32％的同源性和 50％ 的相似性。這些證據(jù)都表明，STnys可能是人類的硫氧還蛋白家族的一 個新發(fā)現(xiàn)的成員。STRF7與人的同源框蛋白CDX－4基因部分同源。同源 盒基因在進化中高度保守，并且作為轉(zhuǎn)錄因子家族的成員調(diào)控那些在脊 椎動物和非脊椎動物的發(fā)育過程中控制組織和細胞特異分化的基因的表 達。同時STRF7和酵母的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)蛋白ADR6也有部分同源。這些都提 示STRF7可能一個新發(fā)現(xiàn)的轉(zhuǎn)錄因子。 最后，將新基因 STRFS連接到 PET28a卜）載體上，誘導(dǎo)后在 BLZI（de3） S 菌株中獲得了可溶性的高表達，之后用鉆離子親和層析柱進行了純化， 為進一步的功能實驗打下了基礎(chǔ)。 總之，我們獲得了5個與IL－6相關(guān)的新基因，并對它們的結(jié)構(gòu)和功 能進行了預(yù)測，其中STRFS基因在原核系統(tǒng)中進行了表達和純化。
【學(xué)位授予單位】：大連理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2001
【分類號】：Q785

【引證文獻】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 馬保鋒;子宮內(nèi)膜異位癥異位內(nèi)膜IL-6水平及超微結(jié)構(gòu)變化[D];暨南大學(xué);2003年

本文編號：2798763