【摘要】： 細(xì)胞因子作用于相應(yīng)受體時(shí)的一個(gè)重要結(jié)果是誘導(dǎo)基因表達(dá)，細(xì)胞 膜上的受體接收特定的來自胞外的信號(hào)刺激后將這種信號(hào)傳至胞內(nèi)，產(chǎn) 生一系列新的信號(hào)分子和有序的系列化級(jí)聯(lián)反應(yīng)，最終對細(xì)胞乃至整個(gè) 生物體的生理功能產(chǎn)生影響。白細(xì)胞介素-6（IL-6）是一種多功能的細(xì)胞因 子。其作用于敏感細(xì)胞時(shí)，必將導(dǎo)致一些基因的表達(dá)，克隆這些基因， 必將有助于進(jìn)一步闡明IL-6信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑及發(fā)現(xiàn)新的信號(hào)分子，同時(shí)也 將有助于進(jìn)一步闡明IL-6與某些疾病的相關(guān)性。我們用cDNA-RDA法和 改進(jìn)的DD-PCR法，分離了IL-6處理前后U937細(xì)胞差異表達(dá)的基因片段； 之后用電子克隆和RT-PCR技術(shù)克隆了一些新基因片段的全長cDNA序列； 并用生物信息學(xué)方法對新基因的結(jié)構(gòu)和功能預(yù)測；最后在原核系統(tǒng)對其 中的STRF8基因進(jìn)行了表達(dá)和純化。 首先，分離了16個(gè)差異表達(dá)的基因序列，反向Northern雜交證實(shí)了 它們與IL-6的相關(guān)性。序列分析表明，其中7個(gè)差異表達(dá)的EST代表在 細(xì)胞生命活動(dòng)或信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中有重要作用的已知基因，9個(gè)是與IL-6作用 相關(guān)的新基因片段。這9個(gè)新基因片段的GenBank接受號(hào)分別為： BE644245、BE644246、BE644248、BE644249、BE644250、BE761007、 BE761008，BE761009和BE761010。 利用dbEST庫的資源，對所獲得的新基因片段進(jìn)行了電子延伸，獲得 了較長的cDNA序列；ORF分析后，對具有典型ORF結(jié)構(gòu)的全長cDNA序列， 用RT-PCR法進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。結(jié)果有5個(gè)全長cDNA序列被克隆，分別 命名為STRF2、STRF6、STRF7、STRF8和STRF11。時(shí)間表達(dá)譜的分析 進(jìn)一步證明了5個(gè)新基因與IL-6的相關(guān)性，Norhtern blot證實(shí)了STRF7 和STRF8在IL-6作用后的U937細(xì)胞中表達(dá)量升高。上述結(jié)果提示這些 新基因與IL-6作用相關(guān)。 用生物信息學(xué)方法對新基因的電子表達(dá)譜、染色體定位、相應(yīng)蛋白的 物理化學(xué)性質(zhì)進(jìn)行了分析，并進(jìn)行了結(jié)構(gòu)和功能預(yù)測。結(jié)果表明，STRFS 具有多個(gè)磷酸化位點(diǎn)，具有硫氧還蛋白家族的結(jié)構(gòu)功能域及硫氧還蛋白 的活性中心，在氨基酸水平上與鼠的硫氧還蛋白有32％的同源性和 50％ 的相似性。這些證據(jù)都表明，STnys可能是人類的硫氧還蛋白家族的一 個(gè)新發(fā)現(xiàn)的成員。STRF7與人的同源框蛋白CDX－4基因部分同源。同源 盒基因在進(jìn)化中高度保守，并且作為轉(zhuǎn)錄因子家族的成員調(diào)控那些在脊 椎動(dòng)物和非脊椎動(dòng)物的發(fā)育過程中控制組織和細(xì)胞特異分化的基因的表 達(dá)。同時(shí)STRF7和酵母的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)蛋白ADR6也有部分同源。這些都提 示STRF7可能一個(gè)新發(fā)現(xiàn)的轉(zhuǎn)錄因子。 最后，將新基因 STRFS連接到 PET28a卜）載體上，誘導(dǎo)后在 BLZI（de3） S 菌株中獲得了可溶性的高表達(dá)，之后用鉆離子親和層析柱進(jìn)行了純化， 為進(jìn)一步的功能實(shí)驗(yàn)打下了基礎(chǔ)。 總之，我們獲得了5個(gè)與IL－6相關(guān)的新基因，并對它們的結(jié)構(gòu)和功 能進(jìn)行了預(yù)測，其中STRFS基因在原核系統(tǒng)中進(jìn)行了表達(dá)和純化。
【學(xué)位授予單位】：大連理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2001
【分類號(hào)】：Q785

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 馬保鋒;子宮內(nèi)膜異位癥異位內(nèi)膜IL-6水平及超微結(jié)構(gòu)變化[D];暨南大學(xué);2003年

本文編號(hào)：2798763