【摘要】：第一部分EV71感染小鼠模型的建立及腦線粒體損傷的檢測 目的：建立EV71感染小鼠模型,檢測感染后不同時段腦線粒體損傷情況。 方法：1日齡ICR小鼠120只隨機分為2組,感染組(60只)每只小鼠腹腔內注射含有EV71(TCID50=104)的DMEM培養(yǎng)基100μl,另60只為對照組,每只小鼠腹腔注射無菌DMEM培養(yǎng)基100μl。觀察小鼠感染后癥狀,并分別于病毒接種后1d、3d、5d、7d、10d、14d各用乙醚安樂死10只感染組小鼠與10只對照組小鼠取大腦。應用熒光定量RT-PCR法檢測小鼠腦組織中EV71病毒載量,應用流式細胞術檢測小鼠腦細胞線粒體膜電位,應用免疫組織化學法檢測小鼠腦細胞胞漿中細胞色素C表達,同時應用光鏡及透射電鏡觀察腦組織病理及線粒體超微結構變化。 結果：感染組小鼠于注射病毒3d候開始出現(xiàn)弓背、少動及后肢麻痹現(xiàn)象,感染5d時小鼠明顯消瘦。熒光定量RT-PCR結果顯示感染組3d及7d小鼠腦組織中EV71病毒載量明顯高于感染5d及10d小鼠(p0.01),對照組、感染組1d及14d小鼠腦組織無病毒核酸檢出。病理切片顯示感染組3d小鼠腦組織呈空泡樣改變,血管周圍出現(xiàn)大量炎癥細胞呈“套袖”樣浸潤,感染組5d小鼠腦組織內有膠質小結形成及噬神經(jīng)細胞現(xiàn)象。流式細胞結果顯示感染組3d及5d小鼠腦細胞線粒體膜電位顯著低于對照組(p0.01),而感染組1d、7d、10d、14d小鼠腦線粒體膜電位與對照組無顯著差異(p0.05)。免疫組化結果顯示感染組3d、5d、7d小鼠腦胞漿細胞色素C陽性細胞比率明顯升高。電鏡結果顯示對照組小鼠腦細胞線粒體膜結構完整,線粒體嵴清晰；感染組3d小鼠腦細胞線粒體略腫脹,線粒體嵴減少,感染組5天小鼠腦細胞線粒體嚴重腫脹,膜結構破壞,線粒體嵴變短或消失,而感染10d時腦細胞線粒體線粒體結構基本恢復正常。 結論：成功建立EV71感染小鼠模型,EV71感染小鼠后,小鼠腦組織出現(xiàn)嚴重的炎癥反應；EV71感染早期即出現(xiàn)腦細胞線粒體膜電位下降及線粒體超微結構的改變,從而導致線粒體的損傷；EV71感染后期腦細胞線粒膜電位與線粒體超微結構的改變呈恢復趨勢。 第二部分EV71感染小鼠腦線粒體損傷可能機制的研究 目的：探討EV71感染小鼠腦線粒體損傷可能的機制。 方法：在已建立的EV71感染小鼠模型基礎上,檢測病毒接種后1d、3d、5d、7d、10d、14d小鼠腦組織中炎癥細胞因子與氧化應激因子的含量。應用雙抗體兩步夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測小鼠腦組織勻漿液中白細胞介素(Interleukin,IL)-6與IL-1β的濃度,比色法檢測腦組織中丙二醛(MDA)含量,硝酸還原法檢測腦組織中一氧化氮(NO)含量,同時分析它們與線粒體膜電位之間的相關性,從炎癥反應和氧化應激兩個方面分析EV71感染小鼠后腦線粒體損傷的可能機制。 結果：感染組3d、5d與7d小鼠腦組織勻漿液中IL-1β濃度較正常對照組明顯升高(p0.01),且與腦線粒體膜電位呈負相關,與腦組織MDA含量與NO濃度呈正相關；感染組3d、5d、7d與10d小鼠腦組織勻漿IL-6濃度較正常對照組明顯升高(p0.01),但與線粒體膜電位變化無明顯相關性；感染組3d、5d及7d小鼠腦組織腦組織MDA含量較正常對照組明顯升高(p0.01),感染組3d與5d小鼠腦組織NO濃度較正常對照組明顯升高(p0.01),且腦組織MDA含量及NO濃度與腦線粒體膜電位呈負相關。 結論：EV71感染過程中,IL-1β可能通過加重腦組織線粒體氧化應激反應而對線粒體功能產(chǎn)生損傷作用；氧化應激是導致EV71感染小鼠腦組織線粒體損傷的機制之一,MDA和NO在氧化應激導致EV71感染小鼠腦組織線粒體損傷中起到了重要作用。
【學位授予單位】：青島大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R373.2

【參考文獻】

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本文編號：2781849