【摘要】：目的優(yōu)化曼氏(歐猥)迭宮絳蟲半胱氨酸蛋白酶(Spirometra erinaceieuropaei cysteine protease,SeCP)基因的體外表達(dá)條件。方法對含有SeCP基因重組表達(dá)質(zhì)粒pMAL-c2X-SeCP的大腸埃希菌TB1在不同培養(yǎng)溫度、不同誘導(dǎo)劑異丙基硫代β-D-半乳糖苷(isopropyl-1-thio-β-galactopyranoside,IPTG)濃度及不同培養(yǎng)時間等條件下進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá),通過SDS-PAGE與蛋白圖譜掃描分析重組SeCP蛋白(rSeCP)的表達(dá)水平,選擇rSeCP適宜的體外表達(dá)條件。結(jié)果SDS-PAGE顯示重組質(zhì)粒pMAL-c2X-SeCP轉(zhuǎn)化大腸埃希菌TB1在常規(guī)誘導(dǎo)條件(培養(yǎng)溫度30℃,1 mmol/L IPTG誘導(dǎo)培養(yǎng)4h)下,rSeCP以可溶性蛋白和包涵體2種形式表達(dá)。當(dāng)重組菌TB1在28、30、31、32、34、35及37℃條件下培養(yǎng)時,rSeCP的表達(dá)量分別占全菌上清蛋白量的9.4%、15.1%、12.2%、6.6%、6.4%、5.4%和1.2%;當(dāng)重組菌TB1在30℃條件下IPTG終濃度0.1、0.2、0.5及1.0mmol/L誘導(dǎo)時,rSeCP表達(dá)量分別占全菌總蛋白量的32.6%、25.7%、26.7%和25.7%;當(dāng)重組菌TB1在30℃條件下IPTG終濃度0.1mmol/L誘導(dǎo)培養(yǎng)1、2、3、4、5和6h,rSeCP的表達(dá)量分別占全菌總蛋白量的13.4%、18.6%、22.4%、33.2%、45.2%和34.6%。結(jié)論培養(yǎng)溫度為30℃,IPTG終濃度為0.1mmol/L誘導(dǎo)培養(yǎng)5h,為重組質(zhì)粒pMAL-c2X-SeCP轉(zhuǎn)染大腸埃希菌TB1表達(dá)rSeCP最佳條件,該研究為大量制備和純化rSeCP奠定了基礎(chǔ)。

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