發(fā)布時(shí)間：2020-08-04 13:55

【摘要】：免疫是保護(hù)機(jī)體防止感染的一種狀態(tài)，包括先天性免疫和獲得性免疫，其中先天性免疫是機(jī)體應(yīng)對(duì)感染的第一道防線，相對(duì)于獲得性免疫，其特異性較差，但反應(yīng)迅速，這種高效的防御機(jī)制能夠抑制大部分病原體感染的發(fā)生。先天性免疫通過PRRs識(shí)別病原微生物存活所必須的PAMPs。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)四種不同的PRRs家族，包括TLRs，CLRs，RLRs和NLRs。病毒雙鏈RNA（dsRNA）是眾多PAMPs中的一類，它可以通過兩種途徑被區(qū)分和識(shí)別。TLR3可以識(shí)別細(xì)胞外或吞噬進(jìn)入內(nèi)涵體中的dsRNA；RIG-I/MDA-5能夠識(shí)別病毒在細(xì)胞內(nèi)復(fù)制過程中產(chǎn)生的dsRNA。RIG-I/MDA5一旦與配體dsRNA結(jié)合，激活形成一個(gè)大的信號(hào)復(fù)合體，其中包括MAVS，TRAFs，TBK1，IKKε等。接著轉(zhuǎn)錄因子NF-κB，IRF3/IRF7和ATF/c-Jun將被激活，誘導(dǎo)表達(dá)TNF-α和IL-6等促炎性因子以及IFN-I。 蛋白質(zhì)的泛素化修飾參與細(xì)胞的各種生理過程，包括先天性免疫過程中信號(hào)級(jí)聯(lián)反應(yīng)的傳遞。通過泛素Lys-48位連接的多聚泛素化修飾主要負(fù)責(zé)細(xì)胞內(nèi)特定蛋白質(zhì)通過泛素蛋白酶體途徑降解，從而將細(xì)胞內(nèi)多余的特定蛋白質(zhì)降解，這種降解方式至少需要目標(biāo)蛋白質(zhì)上4個(gè)泛素分子發(fā)生Lys48位連接。泛素Lys-63位連接的多聚泛素化并不參與蛋白質(zhì)的降解，這種多聚泛素化廣泛參與細(xì)胞內(nèi)的各種生化反應(yīng)過程，如DNA損傷修復(fù)，蛋白質(zhì)復(fù)合體的招募，蛋白激酶的活化和染色質(zhì)的動(dòng)態(tài)變化等。特別是先天性免疫過程中，信號(hào)通路的級(jí)聯(lián)傳遞，信號(hào)復(fù)合體的招募和蛋白質(zhì)活性的調(diào)節(jié)都需要不同形式的泛素化修飾來進(jìn)行調(diào)控。某些蛋白質(zhì)序列中存在泛素結(jié)合結(jié)構(gòu)域（UBDs），它是指能夠與泛素分子非共價(jià)結(jié)合的氨基酸序列。這類蛋白質(zhì)可以通過結(jié)合和調(diào)節(jié)泛素化蛋白質(zhì)，參與細(xì)胞內(nèi)的各種生理過程。越來越多的證據(jù)表明，在先天性免疫系統(tǒng)中，此類蛋白質(zhì)對(duì)于信號(hào)通路的調(diào)節(jié)發(fā)揮著及其重要的作用。 病毒感染過程中，RLRs能夠識(shí)別病毒的不同組分，使細(xì)胞產(chǎn)生應(yīng)答，激活不同轉(zhuǎn)錄因子，轉(zhuǎn)錄和翻譯各種干擾素分子和促炎性因子，這些因子能夠參與病毒的清除，但是如果免疫反應(yīng)過度，反而損傷自身機(jī)體組織，因此適度的控制免疫反應(yīng)是保護(hù)機(jī)體的重要機(jī)制之一，但是如何精確調(diào)控病毒免疫反應(yīng)有待于進(jìn)一步闡明。 為了鑒定新的可能參與RIG-I/MDA5介導(dǎo)的NF-κB和IRFs激活過程的包含UBD結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì)分子，我們?cè)O(shè)計(jì)了一系列針對(duì)這類蛋白質(zhì)基因的siRNAs（small interferingRNAs）文庫，通過下調(diào)這些基因表達(dá)的mRNA，研究這類蛋白質(zhì)在病毒dsRNA激活過程中的功能。為了模擬病毒的感染，我們用poly(I:C)作為病毒dsRNA的模擬物，通過脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的方法激活細(xì)胞內(nèi)受體蛋白質(zhì)RIG-I/MDA5。用NF-κB-luc和IFN-β-luc這兩種報(bào)告基因監(jiān)測信號(hào)通路激活的強(qiáng)度。我們發(fā)現(xiàn)蛋白質(zhì)RAD23A能夠負(fù)調(diào)控RIG-I/MDA5信號(hào)通路的激活，但是它的同源蛋白質(zhì)RAD23B不能。此外，通過數(shù)據(jù)庫的檢索和體內(nèi)相互作用實(shí)驗(yàn)，我們發(fā)現(xiàn)RAD23A和TRAF2在體內(nèi)存在相互作用，并且能夠促進(jìn)TRAF2的多泛素化，下調(diào)TRAF2的蛋白質(zhì)表達(dá)水平。綜上所述，我們的研究提示RAD23A可能作為一個(gè)新的RIG-I/MDA5信號(hào)通路負(fù)調(diào)控分子，調(diào)節(jié)機(jī)體的抗病毒免疫反應(yīng)。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R392.11
【圖文】：

吉林大學(xué)博士學(xué)位論文2圖1.1 煙曲霉菌菌絲覆蓋的果蠅尸體Figure 1.1 Germinating Hyphes of A. fumigatus on a Dead Drosophila（Lemaitre B et al, Cell, 1996, 86: 973-983）傳統(tǒng)觀點(diǎn)認(rèn)為先天性免疫是非特異性的，缺少記憶能力的，能將大部分病原微生物的感染阻擋或消滅在初始階段，但部分病原體能夠成功地突破先天性免疫系統(tǒng)的防御，其中細(xì)菌繞過先天性免疫系統(tǒng)的逃避策略包括細(xì)菌在宿主細(xì)胞內(nèi)完成增殖，以及在表面產(chǎn)生保護(hù)性的莢膜來阻止補(bǔ)體和吞噬細(xì)胞的裂解作用，一些微生物能夠通過影響吞噬細(xì)胞上誘導(dǎo)包被的抗體或者通過模擬宿主細(xì)胞來抑制吞噬作用，使得宿主無法將它們識(shí)別為外源物質(zhì)，從而逃避先天性免疫系統(tǒng)的識(shí)別。獲得性免疫發(fā)生在先天性免疫若干天之后，它能夠特異性的識(shí)別和消除感染，并且能夠留下記憶

在抗原消失后很長時(shí)間內(nèi)保持對(duì)這種抗原的記憶，當(dāng)再接觸這種抗原時(shí)，能迅速增殖分化，快速產(chǎn)生大量的抗體。先天性免疫和獲得性免疫的比較如圖1.2：圖1.2 先天性免疫和獲得性免疫的比較Figure 1.2 comparison of innate and adaptive immunity（Kuby et al. Immunology[M]. 6thed. New York: W.H. Freeman and Company. 2003: 10）先天性免疫和獲得性免疫雖然有許多不同之處，但在對(duì)付入侵的病原體時(shí)，它們又是互相協(xié)同作用的。例如，當(dāng)病原微生物入侵后，首先由先天性免疫做出快速反應(yīng)，補(bǔ)體系統(tǒng)和吞噬細(xì)胞等發(fā)揮殺傷作用，同時(shí)，這些先天性免疫反應(yīng)將以抗原呈遞的方式傳遞到獲得性免疫系統(tǒng)，激活B細(xì)胞和T細(xì)胞，特異性殺傷入侵的病原微生物，從而達(dá)到協(xié)同作用，清除入侵病原微生物的目的。先天性免疫和獲得性免疫之間存在的聯(lián)系是通過細(xì)胞水平的信號(hào)傳導(dǎo)來介導(dǎo)的，因此，機(jī)體在細(xì)胞水平的免疫反應(yīng)是目前研

多樣的E2-E3連接體系[28]。圖1.3為泛素化系統(tǒng)對(duì)底物的級(jí)聯(lián)催化反應(yīng)過程。圖1.3 蛋白質(zhì)的泛素化修飾Figure 1.3 Protein modification pathways for ubiquitin（Bia S. SUMO and Ubiquitin; The Yin and Yang of IGF-1R Function[R]. Stockholm:Karolinska Institutet. 2007: 45）泛素化的第一步是泛素分子被泛素激活酶E1活化，E1酶水解ATP為AMP，使E1活性位點(diǎn)的半胱氨酸和泛素分子C端甘氨酸之間形成二硫鍵。活化的泛素之后被轉(zhuǎn)移至泛素結(jié)合酶E2，這是一個(gè)不依賴于ATP的過程。E2酶的催化與E1酶類似，也與泛素形成二硫鍵。所有已知的E2酶都具有相同的保守球狀結(jié)構(gòu)域，同時(shí)在其高度保守序列中存在半胱氨酸活性位點(diǎn)。E2酶與某些對(duì)泛素化修飾發(fā)揮重要作用的酶具有極高的相似性，這些酶被稱為泛素結(jié)合酶變體（ubiquitin conjugatingenzyme variants, UEVs）[29]。泛素結(jié)合酶變體在結(jié)構(gòu)和序列上與E2類似，但它缺?

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 方迪峰;RAD23A在雙鏈RNA病毒介導(dǎo)的先天性免疫過程中的作用和機(jī)制研究[D];吉林大學(xué);2013年

本文編號(hào)：2780636