【摘要】：人巨細(xì)胞病毒(human cytomegalovirus, HCMV)是皰疹病毒家族p亞科的代表成員,在正常成人體內(nèi)常表現(xiàn)為無癥狀的隱性感染,但在諸如艾滋病人、器官移植患者等免疫缺陷人群中常引發(fā)很高的發(fā)病率和致死率,也是導(dǎo)致新生兒先天發(fā)育遲緩、智力低下的主要病毒誘因。為了闡釋人巨細(xì)胞病毒裂解感染過程中的關(guān)鍵事件,本文從影響病毒復(fù)制過程和立即早期基因啟動子(major immediate-early promoter, MIEP)轉(zhuǎn)錄激活的角度,通過分別研究兩對病毒-宿主蛋白間相互作用,揭示宿主因子調(diào)控病毒裂解感染的分子機(jī)制。 (1)人巨細(xì)胞病毒引發(fā)酶UL70在病毒基因組復(fù)制過程中定位于細(xì)胞核的機(jī)制還不清楚,也沒有宿主因子可以促進(jìn)UL70蛋白入核的研究報(bào)道。我們通過酵母雙雜交篩選獲得可以與UL70蛋白相互作用的宿主因子,熱休克蛋白家族成員DNAJB6;其經(jīng)可變剪接產(chǎn)生兩個蛋白異構(gòu)體,DNAJB6a和DNAJB6b。DNAJB6a由于具有核定位信號而定位于細(xì)胞核,DNAJB6b缺乏這一信號序列則定位于細(xì)胞質(zhì)。間接免疫熒光和DNAJB6表達(dá)上調(diào)或下調(diào)實(shí)驗(yàn)證明,DNAJB6a能夠結(jié)合UL70蛋白幫助后者運(yùn)輸入核,而DNAJB6b結(jié)合UL70蛋白卻阻礙后者運(yùn)輸入核；同時也間接影響了病毒下游蛋白的表達(dá)和成熟顆粒的產(chǎn)出量。這些結(jié)果暗示宿主可以通過調(diào)控DNAJB6蛋白異構(gòu)體的表達(dá)影響病毒引發(fā)酶UL70細(xì)胞定位,進(jìn)而導(dǎo)致病毒基因組DNA復(fù)制和裂解感染過程的變化。 (2)人巨細(xì)胞病毒UL35蛋白可以激活病毒MIEP轉(zhuǎn)錄,其詳細(xì)調(diào)控機(jī)制尚不清楚。酵母雙雜交篩選證實(shí)干擾素誘導(dǎo)產(chǎn)生的細(xì)胞因子IFI35蛋白可以與病毒UL35蛋白相互作用,隨后的免疫共沉淀確定二者特異性結(jié)合,以及它們之間相互作用的結(jié)構(gòu)域。間接免疫熒光發(fā)現(xiàn)UL35蛋白和IFI35蛋白能夠在細(xì)胞核內(nèi)共定位。IFI35蛋白上調(diào)可增強(qiáng)UL35依賴的MIEP轉(zhuǎn)錄激活,但下調(diào)卻幾乎不影響MIEP轉(zhuǎn)錄活性；同樣,IFI35蛋白的表達(dá)上調(diào)促進(jìn)了病毒下游基因的表達(dá)和復(fù)制過程,也加快了病毒的生長進(jìn)程。此外,UL35-IFI35蛋白間相互作用可以促進(jìn)免疫因子的轉(zhuǎn)錄激活,這表明IFI35蛋白在病毒感染過程中發(fā)揮著復(fù)雜的作用,或許受與其結(jié)合蛋白的調(diào)控。所以,人巨細(xì)胞病毒裂解感染過程的起始不僅需要UL35蛋白激活MIEP轉(zhuǎn)錄,還有宿主免疫蛋白參與并促進(jìn)了這一過程。
【學(xué)位授予單位】：武漢大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R373
【圖文】：

某墑煒帕＃%ririon)在人類皰疫病毒中是最大最復(fù)雜的（圖1.1)，直徑約230nm,由內(nèi)向外分別為：包裹線性雙鏈基因組DNA的二十面體核衣殼（capsid),包含病毒基質(zhì)蛋白的被膜（tegument),來源于細(xì)胞脂質(zhì)雙分子層并含有病毒糖蛋白的包膜（envelope) (Chen, Jiang ct al. 1999, Trus,Gibson et al. 1999)。其中，被膜結(jié)構(gòu)是皰疫病毒所特有的，不僅結(jié)構(gòu)有序而1

圖1. 2人皰v病毒基因組結(jié)構(gòu)不意圖（Crough and Khanna 2009)人巨細(xì)胞病毒基因組也是人類皰v病毒家族成員中最大的（圖1.2)，擁有超過230kb的線性雙鏈DNA，包括獨(dú)特的長序列（unique long，UL)，獨(dú)特的短序列（unique short, US)，和重復(fù)序列（repeat regions)。由于每個長序列或者短序列都可以發(fā)生倒轉(zhuǎn)，所以能夠形成四種基因組結(jié)構(gòu)。UL或者US序列可以被四種重復(fù)序列分隔，即末端重復(fù)長序列（terminal repeat long, TRL),中間重復(fù)長序列（internal repeat long

uM Km vnia tnu wir lat* ??n _a? uui fw圖 1. 3 HCMV Towne 株基因組結(jié)構(gòu)(Dunn，Chou et al. 2003)2

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本文編號：2766811