【摘要】：人巨細胞病毒(human cytomegalovirus, HCMV)是皰疹病毒家族p亞科的代表成員,在正常成人體內常表現為無癥狀的隱性感染,但在諸如艾滋病人、器官移植患者等免疫缺陷人群中常引發(fā)很高的發(fā)病率和致死率,也是導致新生兒先天發(fā)育遲緩、智力低下的主要病毒誘因。為了闡釋人巨細胞病毒裂解感染過程中的關鍵事件,本文從影響病毒復制過程和立即早期基因啟動子(major immediate-early promoter, MIEP)轉錄激活的角度,通過分別研究兩對病毒-宿主蛋白間相互作用,揭示宿主因子調控病毒裂解感染的分子機制。 (1)人巨細胞病毒引發(fā)酶UL70在病毒基因組復制過程中定位于細胞核的機制還不清楚,也沒有宿主因子可以促進UL70蛋白入核的研究報道。我們通過酵母雙雜交篩選獲得可以與UL70蛋白相互作用的宿主因子,熱休克蛋白家族成員DNAJB6;其經可變剪接產生兩個蛋白異構體,DNAJB6a和DNAJB6b。DNAJB6a由于具有核定位信號而定位于細胞核,DNAJB6b缺乏這一信號序列則定位于細胞質。間接免疫熒光和DNAJB6表達上調或下調實驗證明,DNAJB6a能夠結合UL70蛋白幫助后者運輸入核,而DNAJB6b結合UL70蛋白卻阻礙后者運輸入核；同時也間接影響了病毒下游蛋白的表達和成熟顆粒的產出量。這些結果暗示宿主可以通過調控DNAJB6蛋白異構體的表達影響病毒引發(fā)酶UL70細胞定位,進而導致病毒基因組DNA復制和裂解感染過程的變化。 (2)人巨細胞病毒UL35蛋白可以激活病毒MIEP轉錄,其詳細調控機制尚不清楚。酵母雙雜交篩選證實干擾素誘導產生的細胞因子IFI35蛋白可以與病毒UL35蛋白相互作用,隨后的免疫共沉淀確定二者特異性結合,以及它們之間相互作用的結構域。間接免疫熒光發(fā)現UL35蛋白和IFI35蛋白能夠在細胞核內共定位。IFI35蛋白上調可增強UL35依賴的MIEP轉錄激活,但下調卻幾乎不影響MIEP轉錄活性；同樣,IFI35蛋白的表達上調促進了病毒下游基因的表達和復制過程,也加快了病毒的生長進程。此外,UL35-IFI35蛋白間相互作用可以促進免疫因子的轉錄激活,這表明IFI35蛋白在病毒感染過程中發(fā)揮著復雜的作用,或許受與其結合蛋白的調控。所以,人巨細胞病毒裂解感染過程的起始不僅需要UL35蛋白激活MIEP轉錄,還有宿主免疫蛋白參與并促進了這一過程。
【學位授予單位】：武漢大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R373
【圖文】：

某墑煒帕＃%ririon)在人類皰疫病毒中是最大最復雜的（圖1.1)，直徑約230nm,由內向外分別為：包裹線性雙鏈基因組DNA的二十面體核衣殼（capsid),包含病毒基質蛋白的被膜（tegument),來源于細胞脂質雙分子層并含有病毒糖蛋白的包膜（envelope) (Chen, Jiang ct al. 1999, Trus,Gibson et al. 1999)。其中，被膜結構是皰疫病毒所特有的，不僅結構有序而1

圖1. 2人皰v病毒基因組結構不意圖（Crough and Khanna 2009)人巨細胞病毒基因組也是人類皰v病毒家族成員中最大的（圖1.2)，擁有超過230kb的線性雙鏈DNA，包括獨特的長序列（unique long，UL)，獨特的短序列（unique short, US)，和重復序列（repeat regions)。由于每個長序列或者短序列都可以發(fā)生倒轉，所以能夠形成四種基因組結構。UL或者US序列可以被四種重復序列分隔，即末端重復長序列（terminal repeat long, TRL),中間重復長序列（internal repeat long

uM Km vnia tnu wir lat* ??n _a? uui fw圖 1. 3 HCMV Towne 株基因組結構(Dunn，Chou et al. 2003)2

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