【摘要】：磷酸化修飾是生物體內(nèi)最重要的蛋白質(zhì)翻譯后修飾之一，蛋白質(zhì)的磷酸化與 去磷酸化過程是真核細(xì)胞生命活動(dòng)最普遍的調(diào)控手段。對(duì)磷酸化蛋白質(zhì)的檢測(cè)和 磷酸化位點(diǎn)的確定是認(rèn)識(shí)蛋白質(zhì)磷酸化在生命活動(dòng)中調(diào)控機(jī)制的重要參考信息， 用蛋白質(zhì)組學(xué)的策略研究生物體的磷酸化修飾也是功能蛋白質(zhì)組學(xué)的重要研究 內(nèi)容。由于磷酸化蛋白質(zhì)在生物體內(nèi)的含量很低，對(duì)它的檢測(cè)和位點(diǎn)分析一直是 個(gè)艱難的工作，而磷酸化蛋白質(zhì)的規(guī)�；治龊臀稽c(diǎn)鑒定更是磷酸化蛋白質(zhì)組研 究面臨的技術(shù)挑戰(zhàn)。本論文的工作包括基于親和提取和生物質(zhì)譜的磷酸化蛋白質(zhì) 分析方法的建立，以及規(guī)�；姿峄鞍踪|(zhì)分析技術(shù)在人胎肝磷酸化蛋白質(zhì)組研 究中的應(yīng)用。 論文第一章以標(biāo)準(zhǔn)磷酸化蛋白質(zhì)為樣本建立了蛋白質(zhì)磷酸化修飾分析技術(shù) 體系：以固相金屬親和色譜為基礎(chǔ)的磷酸肽親和富集技術(shù)幫助從復(fù)雜的肽混合物 中篩選磷酸肽候選物；MALDI-TOF質(zhì)譜圖中的磷酸肽亞穩(wěn)離子峰輔助判斷絲／蘇 氨酸磷酸化類型；對(duì)磷酸肽候選物進(jìn)行磷酸酶水解實(shí)驗(yàn)結(jié)合質(zhì)譜分析可以直接證 明磷酸肽的存在；最后用串聯(lián)質(zhì)譜分析結(jié)合數(shù)據(jù)庫(kù)檢索鑒定用來確定磷酸化位 點(diǎn)。 論文第二章搭建了全程自動(dòng)化的固相金屬親和色譜-反相液相色譜-串聯(lián) 質(zhì)譜磷酸化蛋白質(zhì)分析平臺(tái)，程序控制，方便快捷，便于根據(jù)不同樣本改變實(shí)驗(yàn) 條件，優(yōu)化分析參數(shù)。用標(biāo)準(zhǔn)磷酸肽考察了系統(tǒng)的性能，優(yōu)化了分析參數(shù)并應(yīng)用 于重組人TRF1的體外磷酸化位點(diǎn)的鑒定，鑒定出2個(gè)磷酸化位點(diǎn)，為該蛋白質(zhì) 的激酶磷酸化修飾研究提供了有用的信息。 論文第三章利用所建立的磷酸化蛋白質(zhì)分析方法規(guī)模化分析了人胎肝細(xì)胞 膜提取蛋白質(zhì)中的磷酸化蛋白質(zhì)，共鑒定出28個(gè)磷酸肽，36個(gè)磷酸化位點(diǎn)，分 別歸屬于21個(gè)磷酸化蛋白質(zhì)，其中有27個(gè)磷酸化位點(diǎn)是文獻(xiàn)中沒有報(bào)道過的。 用兩種磷酸化位點(diǎn)預(yù)測(cè)軟件對(duì)鑒定出來的磷酸化蛋白質(zhì)進(jìn)行了位點(diǎn)預(yù)測(cè)，并與鑒 定出的磷酸化位點(diǎn)進(jìn)行了比較。最后對(duì)鑒定出的磷酸化蛋白質(zhì)進(jìn)行了亞細(xì)胞定位 和功能分類分析。
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號(hào)】：R341

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 陳德宏;介孔材料結(jié)構(gòu)和孔道的可控合成及其在電化學(xué)和生物分離中的應(yīng)用[D];復(fù)旦大學(xué);2006年

本文編號(hào)：2756100