【摘要】：人乳頭瘤病毒(Human Papillomavirus，HPV)是一類雙鏈小分子DNA腫瘤病毒。人乳頭瘤病毒16型(Human Papillomavirus Type 16，HPV16)是一種人生殖道感染中常見高危型HPV。分子流行病學(xué)資料和實(shí)驗(yàn)室研究充分論證了HPV與人類惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展之間的關(guān)系，尤其HPV16與子宮頸癌之間的高度相關(guān)性。據(jù)報(bào)道90％以上的子宮頸癌是由HPV16和HPV18引起的。研究表明中國婦女宮頸癌的發(fā)生與HPV16關(guān)系密切。為了降低HPV16感染率及其相關(guān)腫瘤的發(fā)病率和死亡率，研制HPV疫苗勢在必行。 由于HPV難以通過體外組織培養(yǎng)或感染動物而進(jìn)行繁殖，因此研究HPV疫苗的策略主要集中在基因工程技術(shù)方法上。分子生物學(xué)研究發(fā)現(xiàn)HPV病毒結(jié)構(gòu)蛋白的L1和L2構(gòu)成病毒的衣殼部分，單純的L1就足以形成病毒樣顆粒(virus-like particles，VLP)，并具有良好的免疫中和作用。因此我們選用HPV16 L1組裝的VLP作為防治HPV16的感染及相關(guān)疾病的候選疫苗。 HPV16 L1蛋白的一級結(jié)構(gòu)的變異可能會影響其高級結(jié)構(gòu)——VLP的形成，有些L1蛋白變異體由于只能形成殼粒，從而影響了L1蛋白的免疫原性，故必須對疫苗研制所需的L1基因進(jìn)行分析、篩選和鑒定。由于E．coli表達(dá)出的L1蛋白不能形成VLP，即使通過變性、復(fù)性、再變性、再復(fù)性等復(fù)雜的操作雖可形成一定量的VLP，但復(fù)性產(chǎn)率極低，僅有0.02-0.04％，顯然不能滿足于生產(chǎn)和研究所需，難以對L1-VLP的組裝過程及分子生物學(xué)特性、免疫原性做出正確的估價(jià)。而真核細(xì)胞表達(dá)的L1蛋白，可直接獲得較大量的VLP，具有HPV外殼蛋白的天然構(gòu)象和生物學(xué)活性，所以我們選擇真核表達(dá)體系——桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)作為我們的研究工具。
【學(xué)位授予單位】：中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2000
【分類號】：R346
【圖文】：

298220瓜取圖1一2.HPV16LI的PCR擴(kuò)增Figl一2AgroseGelAnalysisofHPV16LlpBR322H/inflmarker;2·LlPCRProduction:3.PCRNegativeeontrol4l，621-517(506)396一344二298220一154一卜沙圖1一3.HPV16LlPCR產(chǎn)物的酶切鑒定Figl一3.EnyzmeDigestionresultsofHPV16Llgene1.pBR322艦inflmarker;2.LIPCRProducts3.LlDigestedbyBmaHI;4.LlDigestedbyEc0RI

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此區(qū)域的序列與他們完全一致。通過DN些華盡幫VecotrN‘”分子生物學(xué)軟件包對序列進(jìn)行了比較，變異情況詳見下面的表裕:圖1一7Figl一7Li基因內(nèi)1264一1312區(qū)段的分析細(xì)yalsisof1264一1312regionofLIgenes1:ProtoytpeLlgene(SeedorfKet公1985)2:ProtoPyteLlse妙enoes妙hisp叩e)r

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 劉紅;廣東分離株HPV16L1基因克隆及其蛋白的分泌表達(dá)[D];暨南大學(xué);2008年

本文編號：2753643