【摘要】：Omega-3和Omega-6多不飽和脂肪酸已被證明能夠在體內(nèi)調(diào)節(jié)機(jī)體的炎癥狀態(tài),而microRNA這種內(nèi)源性非編碼的短鏈RNA能夠被多種多不飽和脂肪酸調(diào)節(jié)并進(jìn)一步引起機(jī)體多種生物學(xué)途徑的變化。Omega-3和Omega-6多不飽和脂肪酸能否通過(guò)調(diào)節(jié)microRNA來(lái)調(diào)節(jié)機(jī)體炎癥水平、具體通過(guò)什么途徑調(diào)節(jié)炎癥,是本文討論的重點(diǎn)。 實(shí)驗(yàn)首先建立了分別由Omega-3和Omega-6多不飽和脂肪酸飲食誘導(dǎo)的、具有抗炎傾向(anti-inflammation)或促炎傾向(pro-inflammation)的大鼠模型。通過(guò)對(duì)兩類大鼠模型血清中的炎癥因子,包括白介素6(Interleukin-6,IL6)、快速反應(yīng)蛋白(C-reactive protein,CRP)、腫瘤壞死因子α(TNF-α)的表達(dá)水平的檢測(cè),驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)對(duì)象適合進(jìn)一步篩選候選microRNA實(shí)驗(yàn)需要。同時(shí)這些結(jié)果也進(jìn)一步證明Omega-3多不飽和脂肪酸顯著的活體水平抗炎作用,包括對(duì)炎癥因子的調(diào)節(jié)和對(duì)大鼠肥胖程度的影響。接下來(lái)通過(guò)microRNA芯片實(shí)驗(yàn),篩選出分別在Omega-3和Omega-6多不飽和脂肪酸飲食誘導(dǎo)炎癥模型中上調(diào)和下調(diào)的microRNA。通過(guò)顯著性分析、聚類分析和功能分析進(jìn)行第一輪篩選,選出最有可能參與炎癥調(diào)節(jié)的候選microRNA來(lái)進(jìn)行實(shí)時(shí)定量PCR的驗(yàn)證。通過(guò)以stem-loop反轉(zhuǎn)錄引物為基礎(chǔ)的實(shí)時(shí)定量PCR實(shí)驗(yàn),確定出在多種多不飽和脂肪酸代謝相關(guān)的器官中被Omega-3和Omega-6飲食調(diào)節(jié)的microRNA。進(jìn)一步,通過(guò)生物信息學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)和軟件,預(yù)測(cè)這些microRNA的靶基因,并對(duì)靶基因所處的免疫調(diào)節(jié)相關(guān)通路進(jìn)行功能聚類分析。結(jié)合文獻(xiàn)和聚類分析富集評(píng)分選取miR-146b作為最終實(shí)驗(yàn)對(duì)象,進(jìn)行人類細(xì)胞水平的microRNA抑制實(shí)驗(yàn)和螢光素酶報(bào)告載體驗(yàn)證實(shí)驗(yàn),證明了miR-146b能夠在脂肪細(xì)胞中直接參與抑制Smad4的翻譯過(guò)程。 本文成功構(gòu)建多不飽和脂肪酸誘導(dǎo)的大鼠炎癥模型,進(jìn)一步印證了文獻(xiàn)報(bào)道的Omega-3抗炎作用和Omega-6促炎作用。借助該模型,結(jié)合傳統(tǒng)生物學(xué)實(shí)驗(yàn)和新興的生物信息工具,篩選出受到Omega-3和Omega-6多不飽和脂肪酸調(diào)節(jié)的并且呈現(xiàn)上、下調(diào)兩極分化趨勢(shì)的microRNA分子,并通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證Omega-3多不飽和脂肪酸在大鼠脂肪細(xì)胞中抑制miR-146b表達(dá)的作用。螢光素酶報(bào)告系統(tǒng)確認(rèn)miR-146b能夠直接調(diào)節(jié)TGF-β信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中的重要調(diào)節(jié)基因Smad4,并且能夠在提高Smad4在大鼠脂肪細(xì)胞中的表達(dá),再加上TGF-β信號(hào)通路是典型的免疫負(fù)調(diào)節(jié)途徑,本文提出,Omega-3多不飽和脂肪酸能夠通過(guò)降低miR-146b的表達(dá),使TGF-β信號(hào)通路中的Smad4基因水平升高,增強(qiáng)TGF-β的生物學(xué)功效,進(jìn)而發(fā)揮其抑制炎癥的作用。
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R363

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2752055