發(fā)布時(shí)間：2020-07-10 06:58

【摘要】： 目的：?jiǎn)味随呙瓜┳宥舅厥且唤M結(jié)構(gòu)相似的真菌次級(jí)代謝產(chǎn)物，具有明顯的毒性效應(yīng)。脫氧雪腐鐮刀菌烯醇(deoxynivalenol, DON)又名嘔吐毒素(vomitoxin VT)，是其中最常見的一種，其結(jié)構(gòu)為3α,7α,15-三羥基-12,13-環(huán)氧單端孢霉-9烯-8酮，為雪腐鐮刀菌烯醇的脫氧衍生物，主要由某些鐮刀菌產(chǎn)生。在全世界范圍內(nèi)，糧食及其制品DON污染谷類的情況均非常普遍。研究表明，在我國(guó)食管癌高發(fā)區(qū)居民飲食中DON也是主要污染霉菌毒素之一。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，DON可抑制生物大分子的合成，也可對(duì)免疫系統(tǒng)發(fā)揮一定的影響。目前有關(guān)DON對(duì)免疫功能影響的研究尚存在一些問題，即DON對(duì)免疫功能的影響多是在體外進(jìn)行的，主要集中在淋巴細(xì)胞因子分泌方面，而且有關(guān)消除DON對(duì)免疫系統(tǒng)影響的研究甚少。機(jī)體的免疫系統(tǒng)是一個(gè)非常復(fù)雜的生物學(xué)系統(tǒng)，包括補(bǔ)體系統(tǒng)、細(xì)胞因子分泌、黏附分子系統(tǒng)、免疫細(xì)胞的凋亡與增殖以及抗原加工遞呈等諸多方面。故進(jìn)一步了解DON對(duì)免疫細(xì)胞的凋亡與增殖以及抗原加工遞呈的影響和如何消除或降低DON對(duì)免疫系統(tǒng)的負(fù)面作用是非常必要的。本研究探討了DON體內(nèi)對(duì)小鼠胸腺細(xì)胞凋亡和增殖的影響并初步探討了維生素C和核黃素體內(nèi)對(duì)DON誘發(fā)小鼠胸腺細(xì)胞凋亡和增殖抑制的阻斷作用；同時(shí)探討了DON對(duì)體外培養(yǎng)的人外周血單個(gè)核細(xì)胞表面人白細(xì)胞抗原Ⅰ類分子（human leucocyte antigenⅠ,HLA-Ⅰ）以及抗原處理相關(guān)轉(zhuǎn)運(yùn)體－１（transporter associated with antigen processing, TAP-1）和低分子量蛋白多肽－２(low molecular weight polypeptides, LMP-2)表達(dá)的影響。旨在全面了解DON對(duì)機(jī)體免疫系統(tǒng)的影響，以期進(jìn)一步分析DON的生物效應(yīng)，揭示飲食DON暴露對(duì)機(jī)體的可能影響及其在我國(guó)食管癌高發(fā)區(qū)腫瘤發(fā)生發(fā)展中的可能作用。 方法： １　脫氧雪腐鐮刀菌烯醇對(duì)小鼠胸腺細(xì)胞凋亡和增殖影響的檢測(cè)分析 WP=5 昆明小鼠48只隨機(jī)分為對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，實(shí)驗(yàn)組根據(jù)DON處理濃度又分為DON 0.5mg/kg、DON 1mg/kg、DON 2mg/kg、DON 4mg/kg和DON 8mg/kg組，共6組，每組８只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組動(dòng)物分別腹腔注射0.2mL不同濃度的DON溶液和生理鹽水。于注射后12 h，股動(dòng)脈放血處死動(dòng)物，取出胸腺組織，應(yīng)用電鏡觀察、DNA瓊脂糖凝膠電泳和流式細(xì)胞定量檢測(cè)技術(shù)（FCM）檢測(cè)不同濃度DON處理胸腺細(xì)胞凋亡和增殖情況。 ２　核黃素和維生素C預(yù)處理對(duì)DON誘導(dǎo)小鼠胸腺細(xì)胞凋亡和增殖抑制的影響。 　　昆明小鼠112只，隨機(jī)分為對(duì)照組、DON （4mg/kg）組、核黃素（1.25mg/kg和10mg/kg）組、抗壞血酸(25mg/kg和100mg/kg)組、不同劑量核黃素（1.25mg/kg,2.5mg/kg,5.0mg/kg,和10.0mg/kg）預(yù)處理+ DON（4mg/kg）組和不同劑量抗壞血酸（25mg/kg,50mg/kg,75mg/kg,和100mg/kg）預(yù)處理+DON（4mg/kg）組，共14組，每組８只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。核黃素、抗壞血酸組及預(yù)處理組分別按分組劑量灌喂核黃素和抗壞血酸，每日1次，每次0.5mL/只，連續(xù)5d；對(duì)照組和DON（4mg/kg）組灌喂等體積的生理鹽水。于最后1次灌喂后12h，對(duì)照組、核黃素（1.25mg/kg和10mg/kg）組和抗壞血酸(25mg/kg和100mg/kg)組分別腹腔注射生理鹽水0.2mL/只，其余各組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分別腹腔注射DON溶液（4mg/kg.BW, 0.2mL /只）。12 h后，股動(dòng)脈放血處死動(dòng)物，取出胸腺組織，應(yīng)用DNA瓊脂糖凝膠電泳和流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)方法進(jìn)行凋亡和增殖的檢測(cè)。 ３　體外培養(yǎng)的人外周血單個(gè)核細(xì)胞表面HLA－Ⅰ抗原檢測(cè) 健康獻(xiàn)血員抗凝靜脈血200mL，采用聚蔗糖-泛影葡胺密度梯度離心法(ficoll-hypaque density gradient centrifugation）分離人外周靜脈血單個(gè)核細(xì)胞，接種于含10%胎牛血清，105U/L青霉素，100mg/L鏈霉素的RPMI 1640培養(yǎng)基中，加入PHA至終濃度300μg/mL，37℃，5%CO2培養(yǎng)48h，更換不含PHA的新的培養(yǎng)基。隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)組加入DON至終濃度分別為50ng/mL，100ng/mL，1000ng/mL和2000ng/mL，對(duì)照組加等體積的生理鹽水。處理24h，更換不含DON的新的RPMI WP=6 1640培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)24h，然后離心收集細(xì)胞。采用流式細(xì)胞定量檢測(cè)技術(shù)（FCM）和蛋白印跡（Western Blotting）檢測(cè)HLA-Ⅰ分子的表達(dá)情況。 ４　體外培養(yǎng)的人外周血單個(gè)核細(xì)胞TAP-1和LMP-2的mRNA及其蛋白表達(dá)的檢測(cè) 　　人外周靜脈血單個(gè)核細(xì)胞的分離培養(yǎng)和處理方法同前，離心收集細(xì)胞提取總RNA，應(yīng)用反轉(zhuǎn)錄－聚合酶連反應(yīng)（RT-PCR）方法檢測(cè)體外培養(yǎng)的人外周靜脈血單個(gè)核細(xì)胞（HPBMc）抗原處理相關(guān)轉(zhuǎn)運(yùn)體－１（TAP-1）和低分子量蛋白－２（LMP-2）mRNA的表達(dá)情況；應(yīng)用流式細(xì)胞定量檢測(cè)技術(shù)（FCM）檢測(cè)TAP-1和LMP-2蛋白的表達(dá)情況。 結(jié)果： １　脫氧雪腐鐮刀菌烯醇體內(nèi)對(duì)小鼠胸腺細(xì)胞凋亡和增殖的影響 FCM DNA直方圖表明，不同濃度DON處理12h后，小鼠胸腺細(xì)胞DNA直方圖二倍體峰前均可見凋亡細(xì)胞特征性的亞二倍體峰。FCM定量檢測(cè)結(jié)果表明，不同濃度DON處理后，各組小鼠胸腺細(xì)胞的平均凋亡百分率都明顯高于生理鹽水對(duì)照組（P0.01），而且隨著DON濃度的升高，凋亡百分率也相應(yīng)升高，在0.5mg/kg到8mg/kg的濃度范圍內(nèi)，兩者呈明顯的正相關(guān)，直線回歸方程為Y=5.75+0.98X ( r=0.788, P0.01, n=8)。透射電
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2003
【分類號(hào)】：R392
【圖文】：

分 核黃素和抗壞血酸對(duì)脫氧雪腐鐮刀菌烯醇誘導(dǎo)小鼠胸腺細(xì)胞凋亡和增殖抑制影響的研究言 31料與方法 31果 34論 36結(jié) 37考文獻(xiàn) 37表 40圖 44分 脫氧雪腐鐮刀菌烯醇對(duì)體外培養(yǎng)人外周血單個(gè)核細(xì)胞HLA- 分子表達(dá)影響的研究言 48

16文 脫氧雪腐鐮刀菌烯醇對(duì)機(jī)體免疫功能影響的實(shí)驗(yàn)研究分 脫氧雪腐鐮刀菌烯醇對(duì)小鼠胸腺細(xì)胞凋亡和增殖的影響言 18料與方法 18果 21論 22結(jié) 24考文獻(xiàn) 24表 26圖 27分 核黃素和抗壞血酸對(duì)脫氧雪腐鐮刀菌烯醇誘導(dǎo)小鼠胸腺細(xì)胞凋亡和增殖抑制影響的研究言 31

分 脫氧雪腐鐮刀菌烯醇對(duì)體外培養(yǎng)人外周血單個(gè)核細(xì)胞LMP2 和 TAP1 表達(dá)影響的研究言 65料與方法 66果 71論 73結(jié) 76考文獻(xiàn) 76表 79圖 80 87 9910

【引證文獻(xiàn)】

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2 李維鋮;沈祥廣;劉戎;張嘉慧;余靜賢;謝玉萍;鄧銜柏;;液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定豬可食性組織中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇?xì)埩袅康姆椒ㄑ芯縖J];華南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào);2013年01期

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本文編號(hào)：2748601