本文關鍵詞：小鼠脊髓源神經干細胞與人骨髓間充質干細胞定向誘導為運動神經元的實驗研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：本部分實驗旨在通過干擾miR-31誘導小鼠脊髓源神經干細胞向運動神經元分化，探討干擾miR-31對神經干細胞向運動神經元分化的影響的同時，進一步檢測miR-615, miR-126,miR-128三種基因的表達變化，探討該三種基因在miR-31基因被干擾后可能發(fā)揮的作用及它們與miR-31可能存在的作用關系。 方法：將懷孕14-15天的昆明小鼠麻醉后取出胚胎小鼠，逐層剝離取出脊髓組織后制備成單細胞懸液，待原代細胞球大量形成并應用免疫細胞化學技術檢測Nestin呈陽性表達后，分為四組：第一組添加入mmu-miR-31Anti-miRTMmiRNAInhibitor，第二組加入Anti-miR Negative Control#1，第三組由培養(yǎng)瓶中接種到六孔板里后，加入DMEM/F12培養(yǎng)基，第四組為完全空白組，即繼續(xù)在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。按照以上分組方法處理后置于37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中孵育3天。3天后分別提取以上分組中細胞的總RNA,應用熒光定量PCR技術及免疫細胞化學技術分析四個分組中運動神經元標記物ChAT基因的表達變化，并同時運用PCR技術檢測miR-615,miR-126,miR-128三種miRNA基因的表達變化。 結果：小鼠胎鼠脊髓源神經干細胞經干擾miR-31誘導后，免疫細胞化學檢測及熒光定量PCR技術均可見運動神經元的標記基因ChAT表達顯著增高，，同時miR-615,miR-126,miR-128三種miRNA也在miR-31被干擾后表達顯著增高 結論：小鼠脊髓源神經干細胞具有向運動神經元分化的潛能，干擾miR-31可以定向誘導脊髓源神經干細胞向運動神經元分化，干擾miR-31可以對miR-615、miR-126、miR-128三種miRNA的表達產生了影響，并共同參與了對神經干細胞定向向運動神經元分化的調控。 目的：本部分實驗通過離心分層所采集的人體骨髓血分離并獲得了人骨髓間充質干細胞，并通過體外培養(yǎng)使其大量增殖與分化，為了解其分化特點及定向誘導其向運動神經元方向分化提供了充分的細胞來源。并在此基礎上通過采用全反式維甲酸（RA）與音猬因子（Shh）聯(lián)合誘導人骨髓間充質干細胞定向向神經干細胞乃至運動神經元方向分化，觀察其在分化過程中Nestin與Hb9的表達變化情況。 方法：采用離心分離法獲得人骨髓間充質干細胞，體外培養(yǎng)使其大量擴增后使用含有RA與Shh的誘導液處理，應用免疫細胞化學及熒光定量PCR方法分析Nestin與Hb9表達的變化情況。 結果：人骨髓間充質干細胞經過RA與Shh誘導后Nestin與Hb9的表達明顯高于未加RA與Shh的對照組及空白組。 結論：hBMSC具有向神經干細胞乃至運動神經元方向分化的潛能。RA與Shh可以在體外誘導hBMSC定向向該方向分化。
【關鍵詞】：脊髓源神經干細胞 miR-31 ChAT miR-615 miR-126 miR-128 骨髓間充質干細胞 運動神經元 Nestin Hb9 人
【學位授予單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R338
【目錄】：

• 前言5-7
• 第一部分 干擾 miR-31 誘導神經干細胞向運動神經元分化的實驗研究7-29
• 摘要7-8
• Abstract8-9
• 研究現(xiàn)況9-10
• 材料與方法10-18
• 結果18-23
• 討論23-26
• 結論26-27
• 參考文獻27-29
• 第二部分 RA 與 Shh 誘導人骨髓間充質干細胞定向向運動神經元分化的實驗研究29-47
• 摘要29-30
• Abstract30-31
• 研究現(xiàn)況31-32
• 材料與方法32-38
• 結果38-42
• 討論42-44
• 結論44-45
• 參考文獻45-47
• 綜述47-53
• 參考文獻50-53
• 攻讀學位期間發(fā)表論文情況53-54
• 致謝54-55
• 個人簡歷55

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前9條

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  本文關鍵詞：小鼠脊髓源神經干細胞與人骨髓間充質干細胞定向誘導為運動神經元的實驗研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：273249