本文關(guān)鍵詞：小鼠脊髓源神經(jīng)干細(xì)胞與人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞定向誘導(dǎo)為運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的：本部分實(shí)驗(yàn)旨在通過干擾miR-31誘導(dǎo)小鼠脊髓源神經(jīng)干細(xì)胞向運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元分化，探討干擾miR-31對神經(jīng)干細(xì)胞向運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元分化的影響的同時(shí)，進(jìn)一步檢測miR-615, miR-126,miR-128三種基因的表達(dá)變化，探討該三種基因在miR-31基因被干擾后可能發(fā)揮的作用及它們與miR-31可能存在的作用關(guān)系。 方法：將懷孕14-15天的昆明小鼠麻醉后取出胚胎小鼠，逐層剝離取出脊髓組織后制備成單細(xì)胞懸液，待原代細(xì)胞球大量形成并應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)檢測Nestin呈陽性表達(dá)后，分為四組：第一組添加入mmu-miR-31Anti-miRTMmiRNAInhibitor，第二組加入Anti-miR Negative Control#1，第三組由培養(yǎng)瓶中接種到六孔板里后，加入DMEM/F12培養(yǎng)基，第四組為完全空白組，即繼續(xù)在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。按照以上分組方法處理后置于37℃，5%CO2培養(yǎng)箱中孵育3天。3天后分別提取以上分組中細(xì)胞的總RNA,應(yīng)用熒光定量PCR技術(shù)及免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)分析四個(gè)分組中運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元標(biāo)記物ChAT基因的表達(dá)變化，并同時(shí)運(yùn)用PCR技術(shù)檢測miR-615,miR-126,miR-128三種miRNA基因的表達(dá)變化。 結(jié)果：小鼠胎鼠脊髓源神經(jīng)干細(xì)胞經(jīng)干擾miR-31誘導(dǎo)后，免疫細(xì)胞化學(xué)檢測及熒光定量PCR技術(shù)均可見運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的標(biāo)記基因ChAT表達(dá)顯著增高，，同時(shí)miR-615,miR-126,miR-128三種miRNA也在miR-31被干擾后表達(dá)顯著增高 結(jié)論：小鼠脊髓源神經(jīng)干細(xì)胞具有向運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元分化的潛能，干擾miR-31可以定向誘導(dǎo)脊髓源神經(jīng)干細(xì)胞向運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元分化，干擾miR-31可以對miR-615、miR-126、miR-128三種miRNA的表達(dá)產(chǎn)生了影響，并共同參與了對神經(jīng)干細(xì)胞定向向運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元分化的調(diào)控。 目的：本部分實(shí)驗(yàn)通過離心分層所采集的人體骨髓血分離并獲得了人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，并通過體外培養(yǎng)使其大量增殖與分化，為了解其分化特點(diǎn)及定向誘導(dǎo)其向運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元方向分化提供了充分的細(xì)胞來源。并在此基礎(chǔ)上通過采用全反式維甲酸（RA）與音猬因子（Shh）聯(lián)合誘導(dǎo)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞定向向神經(jīng)干細(xì)胞乃至運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元方向分化，觀察其在分化過程中Nestin與Hb9的表達(dá)變化情況。 方法：采用離心分離法獲得人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，體外培養(yǎng)使其大量擴(kuò)增后使用含有RA與Shh的誘導(dǎo)液處理，應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)及熒光定量PCR方法分析Nestin與Hb9表達(dá)的變化情況。 結(jié)果：人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)過RA與Shh誘導(dǎo)后Nestin與Hb9的表達(dá)明顯高于未加RA與Shh的對照組及空白組。 結(jié)論：hBMSC具有向神經(jīng)干細(xì)胞乃至運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元方向分化的潛能。RA與Shh可以在體外誘導(dǎo)hBMSC定向向該方向分化。
【關(guān)鍵詞】：脊髓源神經(jīng)干細(xì)胞 miR-31 ChAT miR-615 miR-126 miR-128 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元 Nestin Hb9 人
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R338
【目錄】：

• 前言5-7
• 第一部分 干擾 miR-31 誘導(dǎo)神經(jīng)干細(xì)胞向運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元分化的實(shí)驗(yàn)研究7-29
• 摘要7-8
• Abstract8-9
• 研究現(xiàn)況9-10
• 材料與方法10-18
• 結(jié)果18-23
• 討論23-26
• 結(jié)論26-27
• 參考文獻(xiàn)27-29
• 第二部分 RA 與 Shh 誘導(dǎo)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞定向向運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元分化的實(shí)驗(yàn)研究29-47
• 摘要29-30
• Abstract30-31
• 研究現(xiàn)況31-32
• 材料與方法32-38
• 結(jié)果38-42
• 討論42-44
• 結(jié)論44-45
• 參考文獻(xiàn)45-47
• 綜述47-53
• 參考文獻(xiàn)50-53
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文情況53-54
• 致謝54-55
• 個(gè)人簡歷55

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前9條

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  本文關(guān)鍵詞：小鼠脊髓源神經(jīng)干細(xì)胞與人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞定向誘導(dǎo)為運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的實(shí)驗(yàn)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：273249