【摘要】：動脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)是冠心病和腦卒中發(fā)病的重要病理基礎(chǔ)，心腦血管疾病是當前人類主要死因之一。對AS機制及防治的研究一直是科研及臨床工作的重要課題。 多年的研究表明，AS基本病理損害是有免疫系統(tǒng)參與的慢性炎癥反應(yīng)。尤其是新近一些基因打靶小鼠的研究結(jié)果為了解免疫機制參與動脈粥樣硬化發(fā)病過程提供了有力的依據(jù)。這些結(jié)果也為探討AS的分子機制及防治途徑提供了新的思路。AS是一種多基因病，其發(fā)病不但受外部環(huán)境危險因素的影響，更重要的是有內(nèi)在基因表達異常。從分子水平上探究AS發(fā)生發(fā)展各環(huán)節(jié)中基因表達的變化，是目前研究AS發(fā)病機制和防治途徑的基本思路。 氧化型低密度脂蛋白(oxidized low density lipoprotein，ox-LDL)作為AS重要的促發(fā)因素一直倍受關(guān)注。與之相對應(yīng)的是，大量證據(jù)表明高密度脂蛋白(high density lipoprotein，HDL)及其主要載脂蛋白ApoA-I具有抗AS作用。本實驗室所建的重組h-apoA-I轉(zhuǎn)基因C_(57)BL／6小鼠系，轉(zhuǎn)入的h-apoA-I可通過常染色體穩(wěn)定遺傳，并可在多臟器(如：肝、腎、主動脈等)高效表達。已有工作分別從動物實驗及細胞水平上證實這種小鼠是抗高脂及ox-LDL致AS的理想模型。為延續(xù)前述工作，比較原來對形成AS敏感的C_(57)BL／6小鼠在轉(zhuǎn)入人apoA-I基因，血漿人ApoA-I水平明顯升高并具有抗動脈內(nèi)膜脂質(zhì)沉積和粥樣斑塊形成的條件以后，和vSMC增生相關(guān)基因的變化，本實驗試圖篩選、克隆參與這一過程的相關(guān)基因，從分子生物學水平上探討ox-LDL致AS及ApoA-I抗AS的機制。 本實驗首先用PCR和Northern blot對用于取材的小鼠進行了鑒定，確認其有h-apoA-I整合并表達h-apoA-I mRNA，而后用改良貼塊法原代培養(yǎng)其主動脈的平滑肌細胞，取傳至第五代的vSMC為孵育對象。同時，以小鼠vSMC分裂指數(shù)最高為指標確定30μg／ml ox-LDL孵育三天為誘導激活條件。對以上述條件誘導激活的trvSMC用RT-PCR和Northern Blot證實有h-apoA-I基因表達的增加，進一步確認存在抗AS的保護性背景。而后采用新型減除雜交技術(shù)分離、克隆經(jīng)上述條件誘導和非誘導vSMC
【學位授予單位】：中國協(xié)和醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2003
【分類號】：R363

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本文編號：2721593