發(fā)布時(shí)間：2020-06-18 22:08

【摘要】：目的克隆人親磷脂酸磷脂酶A1(PA-PLA1)β亞型基因,分析該酶基因及其蛋白質(zhì)的序列特征,構(gòu)建PA-PLA1β亞型基因真核表達(dá)載體,為該酶生理功能的研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法從人的腎臟組織中提取總RNA,逆轉(zhuǎn)錄制備cDNA,擴(kuò)增人PA-PLA1β亞型基因并克隆測(cè)序。以Vector NTI8.0、DNASTAR、ORF finder分析所克隆的人PA-PLA1β亞型基因及其蛋白質(zhì)序列。構(gòu)建真核表達(dá)載體pcDNA3.1-PA-PLA1(β亞型),測(cè)序證實(shí)后轉(zhuǎn)染小鼠分泌胰島素細(xì)胞株MIN6,以Western blot檢測(cè)PA-PLA1β亞型蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果人PA-PLA1β亞型基因mRNA全長(zhǎng)為2938bp,編碼區(qū)長(zhǎng)2121bp,編碼一個(gè)由608個(gè)氨基酸殘基組成的蛋白多肽,分子量為83141道爾頓,等電點(diǎn)為5.64。序列比對(duì)表明所克隆的人PA-PLA1β亞型基因與牛PA-PLA1基因同源,并與KIAA0725蛋白及P125蛋白高度相似。系統(tǒng)發(fā)生分析結(jié)果顯示PA-PLA1β亞型與KIAA0725蛋白及P125蛋白在脂肪酶基因家族中形成亞家族。測(cè)序結(jié)果證實(shí)所構(gòu)建的真核表達(dá)載體正確,Western blot檢測(cè)表明該表達(dá)載體可在MIN6細(xì)胞中過表達(dá)PA-PLA1蛋白。結(jié)論所克隆的人PA-PLA1β亞型為已經(jīng)報(bào)道的牛PA-PLA1的同源基因,與KIAA0725蛋白及P125蛋白高度相似,均為細(xì)胞內(nèi)磷脂酶。所構(gòu)建的PA-PLA1β亞型基因真核表達(dá)載體能在MIN6細(xì)胞中過表達(dá)PA-PLA1蛋白。
【學(xué)位授予單位】：桂林醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R3416

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2719901