【摘要】：BclGs屬于僅含有BH3結(jié)構(gòu)域的促凋亡蛋白亞家族成員,其mRNA僅在睪丸中表達(dá),使Bcl-G(Gonad)得以冠名。Bcl-G是Bel-2家族促凋亡蛋白中獨(dú)特的新成員,其基因編碼兩個蛋白,長片段BelG_L和短片段BclGs。它依靠非BH3結(jié)構(gòu)域定位于胞內(nèi)細(xì)胞器,基因定位于染色體12p12,此區(qū)域在50%的前列腺癌、30%的卵巢癌和30%的兒童急性淋巴細(xì)胞白血病中表現(xiàn)為缺失性突變。當(dāng)BelGs過表達(dá)時,顯示了很強(qiáng)的細(xì)胞毒性。它不但可被共表達(dá)的抗凋亡蛋白Bcl-xL所抑制,而且Bcl-xL也能與BelGs發(fā)生免疫共沉淀。除了與Bcl-2家族蛋白發(fā)生相互作用外,BclGs的調(diào)節(jié)機(jī)制仍需進(jìn)一步闡明。我們以BclGs為誘餌,利用酵母雙雜交的方法,從人睪丸cDNA文庫中篩選出長片段BclGL、CSN5/JAB1(c-Jun N端激活結(jié)構(gòu)域結(jié)合蛋白)、與DEAF1(變形表皮自調(diào)節(jié)因子1)相似的蛋白、與LDHA(乳酸脫氫酶)相似的蛋白、與GPx4(谷胱苷肽過氧化物酶4)相似的蛋白和一個新的融合蛋白(未注冊)。其中,JAB1又屬于COP9復(fù)合物的第五組分,負(fù)責(zé)調(diào)節(jié)植物中的光信號、線蟲中的幼蟲發(fā)育、整合素信號、細(xì)胞周期調(diào)控和甾體類激素信號傳導(dǎo)。并且,其功能主要是加強(qiáng)AP-1(c-Jun/c-fos)與AP-1結(jié)合位點(diǎn)(TRE)即AP-1啟動子區(qū)的結(jié)合力與穩(wěn)定性,從而增強(qiáng)AP-1反式轉(zhuǎn)錄活性。并且,巨嗜細(xì)胞移動抑制因子MIF與細(xì)胞內(nèi)蛋白JAB1相互作用,JAB1激活JNK的活性,并增強(qiáng)內(nèi)源性磷酸化c-Jun的水平,而MIF抑制JAB1所增強(qiáng)的AP-1活性,但不能干擾轉(zhuǎn)錄因子NFkappaB的誘導(dǎo)。與之相反,胞外信號通過細(xì)胞表面整合素LFA-1在JAB1的介導(dǎo)下,把信號傳到核內(nèi),激活A(yù)P-1。而HPO可進(jìn)一步加強(qiáng)JAB1對AP-1的激活作用。它增加c-Jun的磷酸化而導(dǎo)致AP-1的激活。并且JAB1是通過非JNK途徑加強(qiáng)c-Jun磷酸化的,以非MAPK信號途徑,在JAB1的介導(dǎo)下激活A(yù)P-1的活性。因此,我們利用酵母雙雜交、體外結(jié)合實驗和細(xì)胞共定位進(jìn)行驗證,表明BclGs與CSN/JAB1可以發(fā)生相互作用。雙報告基因?qū)嶒灡砻鞔俚蛲龅鞍譈clGs與JAB1發(fā)生相互作用,通過CSN5/JAB1的介導(dǎo),降低c-Jun的磷酸化水平,抑制AP-1轉(zhuǎn)錄激活活性,從而引發(fā)細(xì)胞凋亡。在此基礎(chǔ)上,進(jìn)一步研究磷酸化的JNK系列、STAT系列、AKT和LaminA等與細(xì)胞增殖和凋亡相關(guān)的蛋白,利用Western blot檢測其表達(dá),結(jié)果表明:BclGs能夠降低JNK的磷酸化,但通過非MAPK的途徑磷酸化JNK,從而導(dǎo)致下游事件的發(fā)生;BclGs還降低STAT3的磷酸化,但不能刺激STAT家族其它三種成員的磷酸化。BclGs使AKT表達(dá)降低,而Lamin A水平表達(dá)升高�？傊�,促凋亡蛋白BclGs和輔助激活因子JAB1相互作用所引起的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)是對BclGs所致的凋亡機(jī)制的補(bǔ)充;其中,在以BclGs-JAB1相互作用作為關(guān)鍵的分子基礎(chǔ)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程中,JNK和STAT3的磷酸化下降,增加了BclGs所致凋亡的敏感性;AKT的表達(dá)降低,而Lamin A的表達(dá)增高,僅作為對BclGs反應(yīng)的結(jié)果出現(xiàn),可能處于細(xì)胞凋亡的早期。
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2003
【分類號】：R363

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本文編號：2719596