【摘要】：基因免疫既能誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生體液免疫又能誘導(dǎo)產(chǎn)生細(xì)胞免疫，給慢性持續(xù)性病毒感染的防治帶來了新希望。HCV C蛋白結(jié)構(gòu)保守，誘導(dǎo)產(chǎn)生的免疫應(yīng)答能夠使HCV感染者表現(xiàn)為自限型或非臨床型感染，是制備HCV預(yù)防及治療性疫苗較有價(jià)值的抗原蛋白。研究HCV C蛋白基因修飾后，所誘導(dǎo)的基因免疫應(yīng)答和細(xì)胞因子對(duì)HCV C蛋白基因免疫的調(diào)節(jié)作用，將有助于HCV疫苗的研制。HBV preS_2S蛋白含有豐富的T、B細(xì)胞抗原表位，可誘導(dǎo)產(chǎn)生廣泛的抗HBV的免疫應(yīng)答。本研究構(gòu)建雙表達(dá)單元載體Bicistronic，并將HCV C蛋白基因和HBV preS_2S蛋白基因或GM-CSF基因插入其中，制備雙價(jià)基因免疫質(zhì)粒，探索了雙價(jià)基因疫苗免疫應(yīng)答的規(guī)律以及GM-CSF對(duì)HCV C基因免疫的調(diào)節(jié)作用。 一、pcDNA3.0BA Bicistronic載體的構(gòu)建 以pcDNA3.0為母載體先構(gòu)建出MCS上酶切點(diǎn)不同的pcDNA3.0A和pcDNA3.0B。然后再組裝成具有雙CMV啟動(dòng)子的Bicistronic載體pcDNA3.0BA。 二、分泌型信號(hào)肽和跨膜蛋白基因修飾HCV C蛋白基因后對(duì)基因免疫應(yīng)答的影響 化學(xué)合成HBVpreC基因，分別與HCV C69、C154和C191蛋白基因片段連接，其中pc69 C末端再連接上流感病毒跨膜蛋白TM基因，構(gòu)建一系列真核表達(dá)載體。在Cos-7細(xì)胞中進(jìn)行體外瞬時(shí)表達(dá)，經(jīng)~(35)S代謝標(biāo)記、免疫沉淀檢測證實(shí)preC可將HCV C蛋白的C69和C154導(dǎo)出細(xì)胞外，對(duì)C191分泌作
【學(xué)位授予單位】：中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2000
【分類號(hào)】：R392
【圖文】：

載體的構(gòu)建圖1Figl.質(zhì)粒PcNDA3.O的物理圖譜及多克隆部位的限制性酶切位點(diǎn)PhysiealmaPofPeDNA3.0withMCS1.2酶類(l)內(nèi)切酶:EcORI、比ndlll、介nl、助川1、氏ORV、BstXI、叱111、Pvtlll、Pstl、知al、知d、隨Ul、Notl和Apal等購自華美公司、大連寶生物、Biolabs及promega公司;(2)修飾酶:T4DNA連接酶、DNA聚合酶1Klenwo片段、堿性磷酸酶等購自Biolbas及大連寶生物工程公司。1.3主要化學(xué)及生化試劑六細(xì)菌培養(yǎng)用胰化蛋白脈(bact--otPyrtnoe)、細(xì)菌培養(yǎng)用酵母提取物(脈t--oyeastext二)t細(xì)菌培養(yǎng)用瓊脂(bact。一gaar)氨節(jié)青霉素溶液RNA酶A瓊脂糖吸允idxoofidD1fico華北制藥廠AmreseoB1owes七

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本文編號(hào)：2716184