【摘要】：第一部分Hedgehog信號(hào)通路在CCl4誘導(dǎo)的肝纖維化小鼠模型中的動(dòng)態(tài)表達(dá) [背景與目的]肝纖維化是各種原因引起的持續(xù)性肝損傷共有的病理階段,其特點(diǎn)為大量纖維增生并伴有纖維降解的相對(duì)或絕對(duì)不足,細(xì)胞外基質(zhì)沉積,最終可進(jìn)展演變?yōu)楦斡不�。肝纖維化的形成是一個(gè)由多種細(xì)胞介導(dǎo),多種細(xì)胞因子共同參與的復(fù)雜病理過(guò)程。最新的研究顯示Hedgehog (Hh)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在肝纖維化的發(fā)生發(fā)展中可能起重要作用。本實(shí)驗(yàn)旨在研究Hh信號(hào)通路在CCl4誘導(dǎo)的肝纖維化小鼠模型中肝纖維化不同階段的表達(dá)情況。 [方法]7到8周雄性C57BL/6J小鼠32只,隨機(jī)分為正常對(duì)照組(n=12),肝纖維化模型組(n=12),及肝纖維化自發(fā)逆轉(zhuǎn)組(n=8)。腹腔注射0.8ml/kg的CCl4,每周兩次,復(fù)制肝纖維化模型。自發(fā)逆轉(zhuǎn)組于第4周末停用CCl4并正常飼養(yǎng)2周,建立肝纖維化自發(fā)逆轉(zhuǎn)模型。分別于第3周、第6周收集各組小鼠肝臟、血清標(biāo)本。HE染色及Masson染色評(píng)估造模不同時(shí)期小鼠的肝纖維化病變程度。比較各組小鼠肝臟生化指標(biāo)及羥脯氨酸(Hyp)含量。免疫組化、免疫印跡和實(shí)時(shí)定量PCR法分析各組小鼠肝組織Hh通路的配體Shh,核轉(zhuǎn)錄因子Gli1, Gli2,及α平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)的表達(dá)情況。 [結(jié)果]CCl4腹腔注射3周后,肝纖維化模型組小鼠肝臟出現(xiàn)肝細(xì)胞變性壞死,肝小葉結(jié)構(gòu)紊亂,中央靜脈周?chē)皡R管區(qū)纖維沉積增多。CCl4腹腔注射6周后,肝纖維化模型組小鼠肝臟的以上病變程度較第3周加重。自發(fā)逆轉(zhuǎn)組小鼠在停用CCl4兩周后,肝細(xì)胞變性壞死減少,中央靜脈周?chē)皡R管區(qū)纖維組織減少。造模第3周、第6周時(shí),肝纖維化模型組小鼠的丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST),總膽紅素(TBil)及Hyp均明顯高于正常對(duì)照組小鼠(P0.01),其中造模6周時(shí)的ALT、TBil、Hyp顯著高于造模3周時(shí)(P0.05)。自發(fā)逆轉(zhuǎn)組小鼠ALT、AST、TBil及Hyp水平與造模6周的肝纖維化模型組小鼠相比均顯著下降,與造模3周的肝纖維化模型組小鼠相近。免疫組化顯示,相比正常對(duì)照組,造模3周、6周的肝纖維化模型組小鼠肝臟Shh,Gli1,Gli2,α-SMA的表達(dá)均明顯增高,且Shh與α-SMA陽(yáng)染細(xì)胞的分布位置相似,均為匯管區(qū)、纖維間隔及增生的膽管周?chē)?而Glil與Gli2陽(yáng)性染色的分布位置相似,均為匯管區(qū),小葉間靜脈周?chē)�。自發(fā)逆轉(zhuǎn)組小鼠肝臟Shh, Gli1, Gli2, α-SMA陽(yáng)性染色的細(xì)胞數(shù)目較造模6周的肝纖維化模型組減少,接近于造模3周時(shí)水平,甚至更少。免疫印跡和實(shí)時(shí)定量PCR顯示,造模3周、6周的肝纖維化模型組小鼠肝臟Shh, Gli1, Gli2, α-SMA在mRNA及蛋白水平表達(dá)均顯著高于正常小鼠,自發(fā)逆轉(zhuǎn)組小鼠肝臟Shh, Gli1, Gli2, α-SMA在mRNA及蛋白水平表達(dá)較造模6周的肝纖維化模型組顯著減少。 [結(jié)論]雄性C57BL/6J小鼠腹腔注射0.8ml/kg的CCl4,每周兩次,可成功復(fù)制肝纖維化模型。造模6周對(duì)比造模3周,小鼠肝纖維化程度更重。造模4周后撤去CCl4注射,小鼠肝纖維化可發(fā)生自動(dòng)逆轉(zhuǎn),恢復(fù)至造模3周時(shí)水平,甚至程度更輕。Hh信號(hào)通路在正常小鼠肝組織中處于抑制狀態(tài),在肝纖維化模型中被異常激活,且隨著肝纖維化的進(jìn)展,Hh信號(hào)通路活化程度增加,隨著肝纖維化的自動(dòng)逆轉(zhuǎn),活化程度減輕。Hh信號(hào)通路的異常激活可能對(duì)肝纖維化的發(fā)生發(fā)展起重要作用。 第二部分環(huán)巴胺及姜黃在CCl4誘導(dǎo)的肝纖維化小鼠模型中的預(yù)防和治療作用 [背景與目的]環(huán)巴胺是Hedgehog (Hh)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的特異性抑制劑,目前的研究顯示,抑制Hh信號(hào)通路的異�；罨赡苡兄诟纳聘卫w維化。姜黃有抗炎、抗氧化和抗纖維化活性,動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的結(jié)果提示姜黃可預(yù)防肝纖維化,但對(duì)于已經(jīng)形成明顯纖維化的肝組織是否有保護(hù)作用尚有爭(zhēng)議。本實(shí)驗(yàn)旨在研究環(huán)巴胺及姜黃是否可以減輕CCl4誘導(dǎo)的肝纖維化模型小鼠的肝纖維化程度,并研究其治療機(jī)制是否為通過(guò)抑制Hh信號(hào)通路的活化所致。 [方法]7到8周雄性C57BL/6J小鼠72只,隨機(jī)分為正常對(duì)照組(n=12),肝纖維化模型組(n=12),低劑量環(huán)巴胺預(yù)防組(n=8),高劑量環(huán)巴胺預(yù)防組(n=8),姜黃預(yù)防組(n=8),低劑量環(huán)巴胺治療組(n=8),高劑量環(huán)巴胺治療組(n=8)及姜黃治療組(n=8)。腹腔注射0.8ml/kg的CCl4,每周兩次,復(fù)制肝纖維化模型。低劑量環(huán)巴胺預(yù)防組、高劑量環(huán)巴胺預(yù)防組及姜黃預(yù)防組在開(kāi)始注射CCl4的同時(shí),分別給以環(huán)巴胺5mg/kg/d,環(huán)巴胺10mg/kg/d腹腔注射,姜黃400mg/kg/d灌胃治療3周。低劑量環(huán)巴胺治療組、高劑量環(huán)巴胺治療組及姜黃治療組在CCl4造模3周后,在繼續(xù)造模的同時(shí),開(kāi)始分別給以環(huán)巴胺5mg/kg/d,環(huán)巴胺10mg/kg/d腹腔注射,姜黃400mg/kg/d灌胃治療3周。分別于第3周、第6周收集各組小鼠肝臟、血清標(biāo)本。比較正常對(duì)照組、肝纖維化模型組和各藥物干預(yù)組之間肝臟生化、羥脯氨酸(Hyp)水平和肝臟病理組織學(xué)改變。通過(guò)免疫組化、免疫印跡和實(shí)時(shí)定量PCR法分析各組小鼠肝組織Hh通路的配體Shh,核轉(zhuǎn)錄因子Gli1, Gli2,及α平滑肌肌動(dòng)蛋白(a-SMA)的表達(dá)情況。 [結(jié)果]相比同期肝纖維化模型組,低劑量環(huán)巴胺預(yù)防組,高劑量環(huán)巴胺預(yù)防組,姜黃預(yù)防組小鼠肝臟生化、肝組織Hyp含量及組織學(xué)表現(xiàn)均明顯改善。免疫組化顯示,預(yù)防性給予環(huán)巴胺5mg/kg/d,環(huán)巴胺10mg/kg/d或姜黃400mg/kg/d均明顯減少肝纖維化模型小鼠肝組織中Shh, Gli1, Gli2,及a-SMA陽(yáng)染細(xì)胞的數(shù)目。免疫印跡和實(shí)時(shí)定量PCR顯示,預(yù)防性給予環(huán)巴胺5mg/kg/d,環(huán)巴胺10mg/kg/d或姜黃400mg/kg/d均明顯減少肝纖維化模型小鼠肝組織中Shh, Gli1, Gli2,及a-SMA mRNA表達(dá),降低Gli1, a-SMA蛋白水平的表達(dá)。相比同期肝纖維化模型組,低劑量環(huán)巴胺治療組,高劑量環(huán)巴胺治療組,姜黃治療組小鼠肝臟生化、肝組織Hyp含量及組織學(xué)改變均未見(jiàn)明顯改善。免疫組化顯示,比造模延遲3周給予環(huán)巴胺5mg/kg/d,環(huán)巴胺10mg/kg/d或姜黃400mg/kg/d均不能減少肝纖維化模型小鼠肝組織中Shh, Gli1, Gli2,及a-SMA陽(yáng)染細(xì)胞的數(shù)目。免疫印跡和實(shí)時(shí)定量PCR顯示,延遲給予環(huán)巴胺5mg/kg/d,環(huán)巴胺10mg/kg/d或姜黃400mg/kg/d均不能顯著減少肝纖維化模型小鼠肝組織中Shh, Gli1, Gli2,及a-SMA mRNA水平的表達(dá),或降低Gli1, a-SMA蛋白水平的表達(dá)。 [結(jié)論]環(huán)巴胺及姜黃可以預(yù)防和改善CCl4誘導(dǎo)的小鼠肝臟纖維化,其作用機(jī)制與抑制Hh通路的異常激活有關(guān),可能成為治療肝纖維化的新藥物。延遲給予環(huán)巴胺及姜黃均不能顯著改善小鼠肝纖維化,因此對(duì)于用藥時(shí)機(jī)的選擇,仍需要進(jìn)一步研究。
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：R-332;R575.2

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 馬曉麗,張紅衛(wèi);Hedgehog信號(hào)途徑在人類(lèi)腫瘤中作用的研究進(jìn)展[J];國(guó)外醫(yī)學(xué).遺傳學(xué)分冊(cè);2004年06期

2 曹季康;Ontogeny公司的治療退行性疾病藥物hedgehog[J];藥學(xué)進(jìn)展;1996年03期

3 杜娟,劉淑紅,范文紅,沈巖,范志朋,范明,王松靈;Sonic hedgehog在小鼠胚胎頜面部的表達(dá)[J];北京口腔醫(yī)學(xué);2005年01期

4 楊永彬,陳建利,萬(wàn)小平;Hedgehog信號(hào)通路與腫瘤的關(guān)系研究進(jìn)展[J];腫瘤;2005年02期

5 代軍濤;艾開(kāi)興;;Hedgehog信號(hào)通路在胰腺癌中的研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué);2009年03期

6 陳婧文;湯其群;;Hedgehog信號(hào)通路與脂肪細(xì)胞發(fā)育[J];中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào);2011年01期

7 王俊峰;李繼坤;;Hedgehog信號(hào)通路與胃癌[J];中國(guó)癌癥雜志;2009年06期

8 顧紅兵;李繼坤;;Hedgehog信號(hào)通路與腫瘤的關(guān)系研究進(jìn)展[J];現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué);2011年04期

9 邵建國(guó),李兆申,屠振興,高軍,龔燕芳,許愛(ài)芳,滿(mǎn)曉華,金晶;人胰腺癌Hedgehog信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑中PTCH基因表達(dá)載體的構(gòu)建[J];第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2005年01期

10 韓磊;張曉玲;李fE;唐國(guó)華;;Hedgehog通路對(duì)成骨細(xì)胞增殖和分化的作用[J];上海口腔醫(yī)學(xué);2009年03期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 羅時(shí)文;;分子伴侶調(diào)節(jié)Hedgehog信號(hào)通路活化影響腫瘤的發(fā)生與發(fā)展[A];第三屆細(xì)胞結(jié)構(gòu)與功能的信號(hào)基礎(chǔ)研討會(huì)論文摘要[C];2010年

2 遲素敏;劉亞莉;王海波;胡玉珍;;雌激素、Hedgehog信號(hào)通路與乳腺癌[A];中國(guó)生理學(xué)會(huì)2007年消化內(nèi)分泌生殖學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要匯編[C];2007年

3 謝昆;郝昆;田孝東;常志剛;秦昌富;楊尹默;;Hedgehog信號(hào)通路調(diào)控胰腺癌細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的機(jī)制研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)腫瘤學(xué)分會(huì)第七屆全國(guó)中青年腫瘤學(xué)術(shù)會(huì)議——中華醫(yī)學(xué)會(huì)腫瘤學(xué)分會(huì)“中華腫瘤 明日之星”大型評(píng)選活動(dòng)暨中青年委員全國(guó)遴選論文匯編[C];2011年

4 郝昆;田孝東;楊尹默;;Hedgehog信號(hào)通路對(duì)胰腺癌細(xì)胞增殖和侵襲的影響及其機(jī)制探討[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)腫瘤學(xué)分會(huì)第七屆全國(guó)中青年腫瘤學(xué)術(shù)會(huì)議——中華醫(yī)學(xué)會(huì)腫瘤學(xué)分會(huì)“中華腫瘤 明日之星”大型評(píng)選活動(dòng)暨中青年委員全國(guó)遴選論文匯編[C];2011年

5 李勇;黃璇;袁小剛;鄧立斌;盧曲琴;晏潤(rùn)緯;邵佳;陳江;呂農(nóng)華;羅時(shí)文;;胃癌組織與細(xì)胞中Hedgehog信號(hào)通路異常激活的分子機(jī)制及生物學(xué)意義初探[A];“細(xì)胞活動(dòng) 生命活力”——中國(guó)細(xì)胞生物學(xué)學(xué)會(huì)全體會(huì)員代表大會(huì)暨第十二次學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要集[C];2011年

6 秦昌富;田孝東;郝昆;楊尹默;;靶向抑制EGFR聯(lián)合阻斷Hedgehog信號(hào)通路對(duì)胰腺癌細(xì)胞增殖的影響及機(jī)制[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)腫瘤學(xué)分會(huì)第七屆全國(guó)中青年腫瘤學(xué)術(shù)會(huì)議——中華醫(yī)學(xué)會(huì)腫瘤學(xué)分會(huì)“中華腫瘤 明日之星”大型評(píng)選活動(dòng)暨中青年委員全國(guó)遴選論文匯編[C];2011年

7 李文娟;范小芳;陳兆琴;胡良岡;陳然;鄧蔚;龔永生;;間斷低氧模擬睡眠呼吸暫停綜合征小鼠模型的建立[A];中國(guó)睡眠研究會(huì)第六屆學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2010年

8 羅萍;盧雪紅;吳曼;劉樹(shù)軍;尚秀蘭;;來(lái)氟米特對(duì)狼瘡腎炎小鼠的治療作用及機(jī)制探討[A];全國(guó)第八屆中西醫(yī)結(jié)合風(fēng)濕病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2010年

9 鄭春泉;藺林;張魯平;笪翠娣;趙可慶;;2-氨基乙酯二苯基硼酸(2-APB)鼻內(nèi)干預(yù)對(duì)變應(yīng)性鼻炎小鼠模型的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)2010年全國(guó)變態(tài)反應(yīng)學(xué)術(shù)會(huì)議暨中歐變態(tài)反應(yīng)高峰論壇參會(huì)指南/論文匯編[C];2010年

10 李文娟;胡良岡;陳兆琴;范小芳;陳然;龔永生;;間斷低氧模擬睡眠呼吸暫停綜合征小鼠模型的建立[A];中國(guó)生理學(xué)會(huì)第23屆全國(guó)會(huì)員代表大會(huì)暨生理學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)論文摘要文集[C];2010年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 周永紅;讓癌細(xì)胞無(wú)路可逃[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2002年

2 玫雅;野草顯神效[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2002年

3 孔琪　張連峰;小動(dòng)物 大作為[N];健康報(bào);2010年

4 劉霞;美制造出感染丙肝病毒的小鼠模型[N];科技日?qǐng)?bào);2011年

5 本報(bào)記者 韋紹鋒 邢少文 康義文 康義瑤（實(shí)習(xí)） 駐地記者 胡勇;生物醫(yī)藥“海歸”之惑[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2004年

6 記者 仇逸;紅斑狼瘡小鼠模型探病因[N];新華每日電訊;2003年

7 基因潮;看看分子治療藥物的臉[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2002年

8 王迪;胰腺癌小鼠模型面世[N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報(bào);2003年

9 張?jiān)浦?全球游戲市場(chǎng)龍虎斗[N];國(guó)際商報(bào);2002年

10 本報(bào)記者 鄒曦;北京百萬(wàn)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物大遷徙[N];北京科技報(bào);2007年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 章麗娜;Hedgehog信號(hào)通路在肝纖維化小鼠模型中的作用及藥物干預(yù)探索[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2013年

2 安勇;Hedgehog信號(hào)通路對(duì)胰腺癌耐藥的影響及其調(diào)節(jié)機(jī)制[D];南京醫(yī)科大學(xué);2013年

3 張志遠(yuǎn);Hedgehog信號(hào)通路在低氧肺血管重建中的作用及機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2009年

4 方薛泉;Hedgehog信號(hào)通路對(duì)胰腺癌細(xì)胞株氟尿嘧啶化療敏感性的影響研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2010年

5 王梁;膽固醇及辛伐他汀規(guī)律前列腺癌Hedgehog激活機(jī)制研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2010年

6 代恩勇;Hedgehog通路阻斷對(duì)大腸癌細(xì)胞及干細(xì)胞影響的研究[D];吉林大學(xué);2012年

7 林欣大;果蠅(Drosophila)Wingless和Hedgehog信號(hào)傳導(dǎo)途徑的調(diào)控[D];浙江大學(xué);2003年

8 楊昱;Hedgehog信號(hào)通路在海水吸入大鼠急性肺損傷中的作用及其機(jī)制研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2009年

9 邵建國(guó);人胰腺癌Hedgehog信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑膜蛋白受體PTCH重組蛋白的克隆、表達(dá)、多抗血清制備[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2005年

10 胡晶晶;直腸異常隱窩病灶（ACF）中Hedgehog信號(hào)通路的活性改變及其對(duì)結(jié)直腸癌預(yù)警作用的研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2011年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 陳棟;Hedgehog信號(hào)通路與E鈣黏蛋白在甲基硝基亞硝基胍誘導(dǎo)人胃粘膜上皮細(xì)胞后的表達(dá)及意義[D];山西醫(yī)科大學(xué);2013年

2 白鷺鷺;干擾hedgehog信號(hào)通路對(duì)大腸癌細(xì)胞生長(zhǎng)和凋亡的影響[D];吉林大學(xué);2011年

3 樂(lè)雍建;鼻咽癌Hedgehog信號(hào)通路表達(dá)及功能研究[D];中山大學(xué);2012年

4 邱宗林;食管癌細(xì)胞系Hedgehog信號(hào)通路研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2011年

5 羅榮利;前列腺癌中Hedgehog信號(hào)通路的表達(dá)及意義[D];南昌大學(xué);2012年

6 李田;Hedgehog信號(hào)通路分子在舌鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)及其臨床意義[D];南京大學(xué);2013年

7 嚴(yán)偉良;不同方式運(yùn)動(dòng)對(duì)生長(zhǎng)期雄性小鼠成骨細(xì)胞和hedgehog信號(hào)通路的影響[D];華東師范大學(xué);2013年

8 彭翔;大腸癌組織中Hedgehog信號(hào)通路組分蛋白的異常表達(dá)及臨床意義[D];南昌大學(xué);2012年

9 歐陽(yáng)小波;Hedgehog信號(hào)通路對(duì)胃癌細(xì)胞外基質(zhì)降解作用的探討[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2011年

10 吳瑩瑩;Hedgehog信號(hào)通路相關(guān)基因在大腸癌的表達(dá)及其臨床意義[D];廣州醫(yī)學(xué)院;2010年

本文編號(hào)：2714611