【摘要】：目的：前B細胞集落增強因子(pre-B cell colony enhancing factor, PBEF)是聯(lián)系炎癥與胰島素抵抗的橋梁,是研究和治療炎癥所致胰島素抵抗的潛在靶點。然而PBEF與胰島素通路是否存在相互作用及其機制一直存在很大爭議。脂筏作為膜信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的重要平臺,在胰島素信號通路中發(fā)揮著重要作用。本研究首次從一個全新的角度——脂筏來探究PBEF與胰島素受體(insulin receptor, IR)及胰島素信號通路相互作用的機制,以期揭示炎癥所致的胰島素抵抗的新機制。 方法：采用去垢劑及非去垢劑法從A549細胞系中提取脂筏,鑒定PBEF與IRβ在脂筏內(nèi)外的分布。構(gòu)建重組PBEF質(zhì)粒及其突變質(zhì)粒S199,提取PBEF及S199蛋白,研究PBEF對IRp在脂筏內(nèi)外分布的影響。運用免疫共沉淀(immunoprecipitation, IP)研究PBEF、IRβ與Caveolin-1(Cav-1)的相互作用,及其與Cav-1磷酸化的關(guān)系。采用不同時間點研究PBEF對胰島素誘導(dǎo)的Akt活化的影響。 結(jié)果：PBEF在脂筏內(nèi)外均有分布,而IRp在非去垢劑法中僅存在于脂筏。PBEF能誘導(dǎo)IRβ從脂筏轉(zhuǎn)移至非脂筏,NAD也具有類似作用,但該作用不能完全被S199和FK866阻斷。IRβ、PBEF與Cav-1三者相互結(jié)合。PBEF可導(dǎo)致非脂筏中與IRp結(jié)合的Cav-1磷酸化水平明顯增加。給予胰島素處理5min內(nèi)加入PBEF,Akt的磷酸化水平較胰島素單獨作用時降低；而給予胰島素處理5min后再加入PBEF,Akt的磷酸化水平部分恢復(fù)。 結(jié)論： 1、PBEF在脂筏內(nèi)外均有分布。PBEF能誘導(dǎo)IRp從脂筏轉(zhuǎn)移至非脂筏,該作用部分依賴其Nampt酶活性。 2、IRβ、 PBEF與Cav-1三者相互結(jié)合。PBEF促進磷酸化Cav-1與IRp共同移向非脂筏,且該作用與其Nampt酶活性相關(guān)。 3、PBEF能影響胰島素誘導(dǎo)的Akt活化,且該作用具有時間依賴性。
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R363

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 彭倩宜;艾宇航;張麗娜;;前B細胞集落增強因子在炎癥相關(guān)性疾病中的作用[J];國際病理科學(xué)與臨床雜志;2012年04期

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本文編號：2710492