【摘要】： 核轉(zhuǎn)錄因子(Nuclear factor-κB，NF-κB)是一個(gè)廣泛存在于哺乳動(dòng)物細(xì)胞中的轉(zhuǎn)錄因子，參與機(jī)體的炎癥反應(yīng)、免疫反應(yīng)、細(xì)胞增殖與凋亡及其它應(yīng)激反應(yīng)。 為了研究NF-κB在老年多器官功能不全綜合癥發(fā)病過程中的作用以及尋找臨床上可行的防治途徑，本文建立了自然衰老的老化小鼠動(dòng)物模型和酵母多糖誘導(dǎo)的多器官功能不全小鼠模型，利用凝膠阻滯分析(EMSA)和免疫組化方法檢測(cè)NF-κB的DNA結(jié)合活性以及其表達(dá)量在上述模型中的變化。結(jié)果表明NF-κB的DNA結(jié)合活性在老化小鼠的臟器中均顯著上升，同時(shí)其表達(dá)量也有所增加，在心臟、肝臟和肺臟中的上升率分別為17.9％、11.9％、59.4％，以肺部為最高，這與老化小鼠肺臟中的氧化壓力最高呈正相關(guān)。在多器官功能不全小鼠模型中，NF-κB被激活，其DNA結(jié)合活性也較對(duì)照有顯著性增加。本文還利用2D電泳和質(zhì)譜技術(shù)對(duì)老化小鼠肺臟蛋白進(jìn)行了蛋白質(zhì)組學(xué)的研究，以期明確在老化過程中起作用的關(guān)鍵蛋白及其與NF-κB的關(guān)系。結(jié)果顯示，肺臟的蛋白表達(dá)譜與年青小鼠的臟器相比較在11個(gè)點(diǎn)上是有變化的。進(jìn)而對(duì)這11個(gè)差異蛋白進(jìn)行肽質(zhì)量指紋分析并檢索相應(yīng)蛋白，得到3個(gè)有意義的蛋白質(zhì)。綜上，我們認(rèn)為老年多器官功能不全綜合癥產(chǎn)生的機(jī)制之一可能是：在機(jī)體衰老過程中，由于機(jī)體清除自由基的能力下降，體內(nèi)自由基的積累超出了機(jī)體的調(diào)節(jié)能力，導(dǎo)致NF-κB的活化并進(jìn)一步增加自身的表達(dá)量，啟動(dòng)與炎癥相關(guān)基因的表達(dá)，使臟器產(chǎn)生炎癥反應(yīng)，啟動(dòng)老年多器官功能不全綜合癥的發(fā)生。利用酵母多糖誘導(dǎo)小鼠發(fā)生多器官功能不全的研究也證實(shí)了NF-κB的確在其中起重要作用。 本文的另一個(gè)目的是利用基因轉(zhuǎn)導(dǎo)方法，抑制NF-κB的激活過程，以期為解決異種器官移植過程中的延緩性排斥反應(yīng)(DXR)。有研究表明，NF-κB轉(zhuǎn)錄因子的激活導(dǎo)致血管內(nèi)皮細(xì)胞的活化是DXR發(fā)生的關(guān)鍵問題之一。 摘要 AZO是一個(gè)具有鋅指結(jié)構(gòu)的蛋白，它可以通過阻斷以NF一KB為核心的信號(hào) 轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)而抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞的激活，有望成為克服DXR的有效措施。本 文向豬血管內(nèi)皮細(xì)胞(Poreine aortic endothelial eells，PAEC)中導(dǎo)入A20 基因，觀察基因轉(zhuǎn)導(dǎo)對(duì)PAEC內(nèi)NF一KB活性及細(xì)胞表面粘附分子E一選擇素 表達(dá)的影響，探討解決異種移植中克服DXR的策略。結(jié)果表明，AZO的基 因轉(zhuǎn)導(dǎo)可以抑制NF一KB的活性并顯著降低PAEC表面E一選擇素的表達(dá)，抑 制率高達(dá)”.2%。本文還觀察了是一個(gè)來源于人腺病毒5(Ad5)的EIA基因 調(diào)控NF一B轉(zhuǎn)錄活性的作用。通過顯微注射法制作EIA轉(zhuǎn)基因小鼠，在 44只轉(zhuǎn)基因小鼠中有8只的基因組中整合了EIA基因，其中3只的F1代在 mRNA水平上有E IA基因的表達(dá)。通過尾靜脈向陽性小鼠注射人滅活血清， 對(duì)照以生理鹽水替代，結(jié)果顯示，EIA轉(zhuǎn)基因小鼠的臟器表面E一選擇素的 表達(dá)量有顯著性降低，說明EIA基因轉(zhuǎn)導(dǎo)對(duì)抑制異種移植過程中的DXR的 發(fā)生有肯定的作用。上述研究表明A20基因和EIA基因均可以有效地抑制細(xì) 胞表面炎癥分子E一選擇素的表達(dá)，說明這兩個(gè)基因?qū)ρ軆?nèi)皮細(xì)胞的激活 有抑制作用，為解決異種移植過程中延緩性排斥反應(yīng)探索了可行的途徑。
【圖文】：

放射自顯影結(jié)果顯示，在老化小鼠各臟器中(圖1.2，，2、4、6)確有NF-KB轉(zhuǎn)錄因子與特異的寡核昔酸相結(jié)合，在肺臟中的結(jié)合活性最高;而在年青小鼠的臟器中則沒有激活的NF一KB存在(圖1.2，工、3、5)。提示在老化過程中，NF一B可能會(huì)啟動(dòng)一些與老化有關(guān)的基因，但其中所涉及到的基因目前還不清楚，有待于進(jìn)一步研究。圖12年青小鼠與老化小鼠臟器核蛋白的EMSA結(jié)果]、3、5年青小鼠心臟、肝臟和肺臟2、4、6老化小鼠心臟、肝臟和肺臟

2.3.3ZD電泳圖象分析掃描后的圖象利用ImageMasterZDEli七e3.01軟件進(jìn)行分析。得到結(jié)果如圖2.差異3和表2.3。經(jīng)比較，年青小鼠與老化小鼠蛋白表達(dá)譜在n個(gè)點(diǎn)上有顯著性。其P工/MW值見表2.3;在2D電泳圖上的位置見圖2.3。在年青小鼠肺臟中有表達(dá)而在老化小鼠肺臟中不表達(dá)的蛋白;化小鼠的肺臟中出現(xiàn)而在年青小鼠肺臟中不表達(dá)的蛋白。其中ZD一1一ZD一7是ZD一8一ZD一11是在老
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2003
【分類號(hào)】：R363

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