【摘要】： 葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶(UDP-Glucuronosyltransferases，UGTs)是一類位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的膜結(jié)合糖蛋白，它是藥物Ⅱ相代謝中的一個基因超家族，具有廣泛的內(nèi)、外源性底物。UGTs所催化的葡醛酸綴合反應(yīng)以UDP-葡醛酸作為糖的給予體，將葡醛酸基連接到含-OH、-COOH、-NH_2、-SH等基團的藥物分子上，使成為水溶性代謝物。UGTs能催化各種各樣外源和內(nèi)源的親脂性糖苷配基底物與葡醛酸的結(jié)合，該反應(yīng)是機體清除外源性(如藥物和殺蟲劑)和內(nèi)源性(如膽紅素和甾體激素)親脂性化合物的一個主要方式，也是藥物Ⅱ相代謝的重要方式。 UGT1A9是UGT1A亞族中的一員。UGT1族基因基因由四個共同的外顯子和一個不同的第一外顯子組成，在人類至少已鑒定出12種不同的UGT1族第一外顯子[4，5]，，其中，UGT1A族至少有9種蛋白，UGT1A9是其中的一員。UGT1A9未見有多態(tài)性基因報道。 人類UGTs的表達以組織特異性的方式在肝臟和肝外表達。肝臟是葡醛酸綴合反應(yīng)的主要場所，幾乎含有所有的UGT同工酶。但是UGTs的組織分布并不局限于肝臟，許多肝外組織也表現(xiàn)出一定的葡醛酸轉(zhuǎn)移酶的活性。UGT1A9主要存在于肝中，但也有發(fā)現(xiàn)其他組織如結(jié)腸、腎臟、前列腺、睪丸、乳腺、卵巢、皮膚以及腫瘤組織中有所表達。 UGT1A9可被多環(huán)芳烴誘導(dǎo)及其他化合物如抗氧化劑型誘導(dǎo)劑t-butylhydroquinone。有關(guān)UGT1A9的代謝作用研究不多，從文獻報道來看，UGT1A9主要催化羥基上的綴合反應(yīng)，形成O-葡醛酸苷，此外它也能與羧基、羥肟酸形成葡醛酸苷。UGT1A9與黃酮類化合物的代謝作用未見報道。 UGTs的代謝底物多種多樣。過去的研究認為，葡醛酸綴合反應(yīng)有各種底物，而且不同的同工酶催化不同結(jié)構(gòu)類型的化合物，但現(xiàn)在認識到UGTs與底物的關(guān)系 不是—一對應(yīng)的關(guān)系，底物譜相互有重疊。UOTS作為一套同工酶系統(tǒng)，具有廣 泛的底物冶，滿足體內(nèi)的內(nèi)源性和外淚性物質(zhì)的代謝． 關(guān)于UGTS的組織分布和調(diào)節(jié)這方面的知識還不多，過去常采用肝微粒體進 行研究，但有以下缺陷： u）肝微粒體是多種藥酶沮合的復(fù)雜體系，因而實驗結(jié)果難以區(qū)分是＠一種 同工醇的作用． （2）UOTs同工酶詣存在明顯的種同差異和個體差異． （3）有的亞族在肝中報少甚至沒有而是存在于其他器官中。 ． ‘為解決上述問題，國際上人們己經(jīng)廣泛采用建立各種 UGT轉(zhuǎn)基因細胞系的方 式試驗，在明確基因構(gòu)成的倩況下直接獲得由特定基因所表達的 UGT同工酶，fi 什對性地研究該酶對藥物的代謝作用。 在建立葡醛酸綴合酶轉(zhuǎn)基因細胞系方面國內(nèi)還未有報道，藥物的葡醛酸綴合 反應(yīng)研究在國際上也是近十年才達步開展起來的一個藥物代謝研究領(lǐng)域．本實驗 在日內(nèi)率先建立了UOTIAg的轉(zhuǎn)基因綱囪系，運用DNA重紐拄求，采用叨凋四 作為表達我體，在中國倉鼠肺綱胞中使UGTIAg得到了有效地表達，并且以此作 為研究葡醛酸代謝的體外試驗?zāi)Ｐ�，開展了一些藥物的葡醛酸綴合反應(yīng)研究，預(yù) 測藥物經(jīng)葡醛酸綴合反應(yīng)代謝所蘊涵的代謝特征。 由于boTIAg主要催化羥基的們?nèi)┽劸Y合反應(yīng)，本實驗選擇具有不同結(jié)構(gòu)類型 的含羥基化合物作為底物，一類是羥基處于芳環(huán)的異丙酚和撲熱息痛，其中異丙 酚是gylAg的專屬性底物，可以作為活性比較的參照，另一類是羥基處于脂鏈的 普莢訖爾和普羅帕酮．在上述四種化合物研究的基礎(chǔ)上，考用類黃酮化合物對 叭Xs有各種影響，并且具有各種酚羥基結(jié)構(gòu)，本實驗選擇了四種類黃酮化合物即 們皮素、山費酚、異鼠辛素和蘆丁作為底物，觀察IX；1’IAg對它們代謝的作用情況， 試圖了解IjGTIAg在這些化合物的葡醛酸代謝過程中所起的作用。 UGTIAg基因的克醫(yī)和表達質(zhì)粒的構(gòu)建 采用RTppR方法從人肝紐織中分別 克隆出UG TIA 9的C DNADNA，通過克匡載體昨＊＊1擴槽后，用雙酶切組成粘性末 端與 u表達載體連接．構(gòu)建 UGTMg重組子兩端的內(nèi)切酶分別是Hd Ill 和No�。亟M子質(zhì)粒DNA經(jīng)過亞克醫(yī)過程將基因從克臼載體轉(zhuǎn)到表達載體上， L 經(jīng)過刪電泳運析袋鮑化，用于轉(zhuǎn)染CHL N山． ！‘住塞田包回窒偽兇十 田力世的匠甫匯l旦肋勿囪桂山灶業(yè)構(gòu)兇0的舌們厭偽 嗎 PREpoUGTIAg轉(zhuǎn)染培養(yǎng)的CHL細胞，通過G41g篩這一個月后獲得轉(zhuǎn)基岡細胞 系，建立了CHtrUGTIAg轉(zhuǎn)基因綱胞系． 通過大量培養(yǎng)轉(zhuǎn)基因細胞系，捉取細胞Sg成分，用Lowry法測定蛋肉濃度 后，該Sg成分即用于藥物代謝研究．
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2002
【分類號】：Q55

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 欒連軍,曾蘇,劉志強,傅旭春;羥基化合物及其葡醛酸苷化學(xué)結(jié)構(gòu)與RP-HPLC保留行為相關(guān)性研究[J];高等學(xué)校化學(xué)學(xué)報;1997年01期

2 李新,劉瓊,曾蘇;苯巴比妥誘導(dǎo)對普萘洛爾對映體的體外葡醛酸綴合反應(yīng)立體選擇性的影響[J];浙江大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);1999年05期

本文編號：2670152