【摘要】：人的泛素類(lèi)似蛋白hPLIC-2是酵母Dsk2和鼠PLICs(proteins link IAP and cytoskeleton，PLICs)的同源類(lèi)似物，作為蛋白酶體底物載體發(fā)揮作用，并可能 在蛋白酶體及泛素化的酶系之間建立功能聯(lián)系。本研究通過(guò)體內(nèi)、體外相互作用 研究，表明hPLIC-2可與c-Abl直接相互作用，hPLIC-2C端的UBA是hPLIC-2與 c-Abl相互作用的重要結(jié)構(gòu)域。而c-Abl通過(guò)其N(xiāo)端片段與hPLIc-2相互作用，調(diào) 節(jié)hPLIC-2參與的蛋白質(zhì)經(jīng)泛素-蛋白酶體降解。體內(nèi)蛋白酪氨酸磷酸化分析和體 外激酶分析表明，c-Abl不能磷酸化hPLIC-2，因此c-Abl以激酶非依賴(lài)方式與 hPLIc-2相互作用并調(diào)節(jié)蛋白質(zhì)降解。即這種作用僅依賴(lài)于c-Abl或Arg蛋白的存 在，而與其激酶活性無(wú)關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞內(nèi)的反應(yīng)氧可以促進(jìn)c-Abl與hPLIC-2 的相互作用，，可能與c-Abl在氧化應(yīng)激反應(yīng)中促進(jìn)蛋白質(zhì)降解相關(guān)：c-Abl和 hPLIC-2過(guò)量表達(dá)導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)總蛋白泛素化水平升高：有趣的事，抑制hPLIC-2的 表達(dá)也可促進(jìn)細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)的泛素化。c-Abl可促進(jìn)hPLIC-2與蛋白酶體亞基結(jié)合， 從而可能促進(jìn)hPLIC-2所結(jié)合泛素化蛋白的降解；c-Abl促進(jìn)hPLIC-2與泛素化蛋 白結(jié)合，促進(jìn)hPLIC-2在細(xì)胞內(nèi)收集泛素化底物。綜上所述，c-Abl通過(guò)與hPLIC-2 的相互作用可能是調(diào)控蛋白質(zhì)經(jīng)泛素-蛋白酶體降解的新機(jī)理。
【圖文】：

構(gòu)建hpLIC一2的原核表達(dá)載體pGEx一ZT-hpLIC一2。09，隨機(jī)挑取的轉(zhuǎn)化子經(jīng)PCR和酶切鑒定(圖IA，B)獲隆進(jìn)行測(cè)序(測(cè)序結(jié)果見(jiàn)附錄)，結(jié)果獲得插入序列與一致、且閱讀框架正確的hPuC一2原核表達(dá)載體pGEx一ZT-

結(jié)果見(jiàn)圖ZB，表明05下沖Lle一2能與olutathioneSephorase4B結(jié)合，并得到純化。而同時(shí)純化的蛋白和上清電泳后將蛋白轉(zhuǎn)印至上，抗GST抗體免疫印跡分析，表明所表達(dá)的蛋白為GST融合蛋白，預(yù)期值相符(約92kD)(圖ZC)。
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類(lèi)號(hào)】：Q55

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本文編號(hào)：2668395