【摘要】：分化抗原是人血細胞膜胞膜分子中的一組抗原決定簇，有著十分重要的生物學意義。迄今為止，已命名的人類白細胞分化抗原已有166個。近年來，隨著分子生物學知識與技術的摻入，極大地促進了分化抗原結構與功能的研究。 本論文的目的是尋找和克隆編碼新分化抗原的cDNA，測定其核苷酸順序，，分析此序列及其編碼蛋白質的性質。論文工作分兩部分： 1．5C5 cDNA 數年前本實驗室曾用單抗5C5和5C5-G1的混合物從一個人扁桃體細胞λgt11 cDNA文庫(ATCC No.37545)篩選到一個613bp長的cDNA。由于它并非全長，我用此cDNA 5’端467bp核苷酸序列作探針，再行篩選。但從另一個人扁桃體細胞λgt11 cDNA文庫(ATCC No.37546)僅篩選到一個序列完全相同的467bp cDNA。鑒于單抗5C5和5C5-G1是用人活化B細胞3D5免疫小鼠并用3D5細胞作篩選靶細胞得到的，我構建了3D5細胞的λgt11 cDNA文庫。庫中九噬菌體滴度為1.1×10~6，插入重組率為97.5％，插入片段大小在0.4-2.5Kb之間，平均為1.6Kb左右。用467bp cDNA做探針從3D5細胞λgt11 cDNA文庫中篩選到17個陽性克隆，其中一部分克隆的插入片段長0.9Kb左右，另一部分長0.7Kb左右。測序得到長908bp和746bp兩個cDNA，稱5C5-1 cDNA與5C5-2 cDNA。5C5-1 cDNA中從19bp至846bp為開放閱讀框架，編碼276個從的蛋白質。此蛋白質從序列中有兩個明顯的疏水區(qū)(85-110AA或180-200AA)。跨膜結構預測95-112AA和186-208AA為兩個有意義的跨膜螺旋區(qū)，跨膜方向為前者由膜內向外，后者由膜外向內�；蚍治霭l(fā)現，5C5-1 cDNA編碼蛋白質中有六種基序。2-23AA形成亮氨酸拉鏈結構，268-271AA為cAMP-cGMP依賴性蛋白激酶磷酸化位點，144-152AA為酪氨酸激酶磷酸化位點，75-78為酪氨酸激酶Ⅱ磷酸化位點。另外，還有4個蛋白激酶C磷酸化位點及10個N-myristylaion位點。上述結果提示，5C5-1 cDNA編碼的蛋
【圖文】：

圖28.5D4eDNA克隆1和克隆3的比較Fig28.ComParisonof5D4eDNAelone1andelone3克隆1eDNA序列全長1846bp(圖29)。5，端。端87bp為非編碼區(qū)，內含兩個連續(xù)的終止密碼子。AGT的一3和+4為嚓吟堿基，符合真核細胞RNA有效轉錄的需要。88bp至1209bp之間1122個bp組成一個完整的開放閱讀框架，編碼374個氨基酸的蛋白。然后是終止密碼子，以及637個bp的3’非編碼區(qū)，內含加尾信號AATAAA，及PolyA尾。由此可見，此DcNA序列為一完整序列。經Blasnt方式與GeBnank資料進行同源性比較，未發(fā)現有相同基因，因此申請GenBank登記，按收號為AF043290。圖29中上行為5D4cDNA核普酸序列，下行為由此cDNA序列中開放閱讀框架所推導出的蛋白質氨基酸序列。在此蛋白質氨基酸序列中半朧氨酸十分豐富。3.D54全長DcNA編碼蛋白的同源性比較及二級結構的分析3.1同源性比較，
【學位授予單位】：中國協和醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：1998
【分類號】：R392

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