【摘要】：胰島素樣生長因子-1(Insulin-like growth factor-1 IGF-1),胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白-1(Insulin-like growth factor binding protein-1 IGFBP-1)是有重要功能的蛋白質(zhì)因子。它們具有相互作用,目前已知這種相互作用可以調(diào)節(jié)游離IGF-1含量、改變其分布,進(jìn)而對生長發(fā)育、腫瘤發(fā)生發(fā)展、糖代謝等產(chǎn)生影響,但這些作用機(jī)制尚不十分清楚。此外,IGF-1具有胰島素樣作用,但因種種原因阻礙其在糖尿病治療中的應(yīng)用。我們根據(jù)分子生物學(xué)、生物信息學(xué)理論,采用基因重組表達(dá)、酵母三雜交等技術(shù)對影響IGF-1、IGFBP-1作用過程中的蛋白質(zhì)因子進(jìn)行篩選,構(gòu)建IGF-1突變體并對其進(jìn)行了系列研究。全文共分兩個(gè)部分: 一、IGF-1基因克隆和突變體構(gòu)建、表達(dá)及功能研究 采用PCR方法,從人胎肝cDNA文庫中成功釣取了IGF-1基因,并根據(jù)生物信息學(xué)理論結(jié)合文獻(xiàn)報(bào)道構(gòu)建了兩個(gè)IGF-1突變體——IGF97、IGF191。利用pGEX-4T-1構(gòu)建了IGF-1、IGF97、IGF191原核表達(dá)載體,在大腸桿菌中實(shí)現(xiàn)了突變體融合表達(dá),采用親和層析法和凝血酶切割分離獲得重組IGF97、IGF191蛋白。采用pcDNA3.1構(gòu)建了真核表達(dá)載體,實(shí)現(xiàn)了IGF-1、IGF97、IGF191在COS-7細(xì)胞實(shí)現(xiàn)表達(dá);觀察了純化的突變體IGF97、IGF191和純品IGF-1對內(nèi)皮細(xì)胞ECV304增殖的影響,并將構(gòu)建的真核表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染內(nèi)皮細(xì)胞ECV304后觀察細(xì)胞增殖情況,結(jié)果顯示IGF-1、IGF97對細(xì)胞具有同樣的促增殖作用,而IGF191促增殖作用明顯低于IGF-1。還采用雞胚尿囊膜血管觀察技術(shù)在體觀察了IGF-1、IGF97、IGF191對新生血管形成的影響,結(jié)果顯示:IGF-1、IGF97具有促血管新生作用,而IGF191明顯弱于IGF-1,綜上結(jié)果提示突變體IGF191促組織細(xì)胞生長作用明顯減弱。 二、影響IGF-1、IGFBP-1相互作用蛋白的研究 酵母三雜交是近年發(fā)展出來的研究三個(gè)蛋白質(zhì)間相互作用的新技術(shù)。我們采用CLONTECH公司酵母三雜交技術(shù)對IGF-1、IGFBP-1進(jìn)行了研究。
【圖文】：

1、PCR結(jié)果:理論上應(yīng)為21oPb，電泳結(jié)果符合設(shè)想，見圖1。2、構(gòu)建的pT一GIF一1質(zhì)粒鑒定:EcRoIS/al工酶切鑒定，理論上應(yīng)切下24Obp片段，從電泳結(jié)果看也符合理論值。見圖2圖l從胎肝cDNA文庫中釣取工GF一1基因圖2構(gòu)建的pT一GIF一1酶切鑒定

體IGF97、IGF19z，并分別插入pGEM一T載體上，鑒定。2、結(jié)果:EocR工/Sall酶切鑒定，，應(yīng)切下220士bp片段，電泳結(jié)果符合預(yù)期值(見圖3)。pT一GIF97、pT一GIF191經(jīng)測序，結(jié)果符合預(yù)期要求。圖3突變體pT一工GF97、pT江GF191酶切鑒定電泳圖
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2003
【分類號】：R346

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 魏平;胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白-1(IGFBP-1)研究進(jìn)展[J];國外醫(yī)學(xué)(分子生物學(xué)分冊);2002年05期

2 強(qiáng)新,李紅梅,于s

本文編號：2654437