【摘要】：基因治療是指將遺傳物質(zhì)導(dǎo)入患者體內(nèi)，以使患者獲得治療的一種新型治療方式。要獲得理想的臨床治療效果，，必須實現(xiàn)靶向性基因治療。根據(jù)基因治療的原理及過程，其靶向性包括以下三個方面：治療基因轉(zhuǎn)移的組織特異性、轉(zhuǎn)移基因整合的特異性及轉(zhuǎn)移基因的適宜表達。目前，一些實驗室通過改造基因治療載體結(jié)構(gòu)等基因工程手段獲得靶向性治療已取得進展。基因原位修復(fù)策略是一種直接的基因療法，它針對基因缺陷部位進行修復(fù)，保持了基因原有的染色質(zhì)環(huán)境，因此是一種理想的靶向性基因治療方式。同源重組雖然可以實現(xiàn)缺陷基因的原位替換，而且利用正負篩選的方法可提高ES細胞中同源重組的效率，但同源重組在哺乳動物體細胞中發(fā)生的效率極低(10~(-5)-10~(-6))，正負篩選也不適用于體細胞，對于體細胞的基因治療而言無實際應(yīng)用的價值。 RNA／DNA嵌合寡核苷酸介導(dǎo)的嵌合體修復(fù)術(shù)是近年來發(fā)展的一項新技術(shù)。這項技術(shù)的創(chuàng)立是根據(jù)RNA可提高同源配對效率的發(fā)現(xiàn)，合成出了被稱為嵌合體的RNA／DNA雜合寡核苷酸分子，將其導(dǎo)入細胞后，嵌合體可有效地與基因組中同源序列相配對，并在靶位點處形成錯配堿基對，體內(nèi)修復(fù)機制能以導(dǎo)入的RNA／DNA寡核苷酸為模板，修改基因組中的同源序列，從而實現(xiàn)基因的定點糾錯。嵌合修復(fù)的效率比同源重組的效率可高10~3-10~6倍，在細胞及整體動物中都有成功的報道。 最近在應(yīng)用細胞抽提物系統(tǒng)對嵌合體修復(fù)術(shù)的機制研究中發(fā)現(xiàn)，嵌合體的兩條鏈在定點糾錯反應(yīng)中發(fā)揮的作用不同，DNA鏈具有引發(fā)糾錯反應(yīng)的功能，而摻有RNA的嵌合鏈不具備糾錯功能。據(jù)此發(fā)現(xiàn)一種帶有硫代修飾末端的單鏈DNA的糾錯效率比初始設(shè)計的嵌合體高3-4倍，若單鏈DNA寡核苷酸能用于體細胞的定點糾錯，則有望獲得更高的基因定點糾錯的效率，以便應(yīng)用于由點突變引起的人類遺傳性疾病的基因治療。 為了快速、準確地測定定點糾錯事件的發(fā)生，以便確定各種打靶分子的定點糾錯的功能，我們設(shè)計了哺乳動物細胞—定點糾錯熒光報告系統(tǒng)。其過程是將定點突變的
【學(xué)位授予單位】：中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2001
【分類號】：R346;Q789;R556

【共引文獻】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 湯富酬,韓嶸,薛友紡;RNA/DNA嵌合分子介導(dǎo)的高效基因修復(fù)[J];遺傳;2000年04期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前3條

1 李竹紅;用轉(zhuǎn)座子與RNA/DNA嵌合寡核苷酸探討靶向性基因治療[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2000年

2 吳雪松;單鏈寡核苷酸介導(dǎo)基因定點修復(fù)的作用機制研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2003年

3 楊宇明;膀胱癌干（起始）細胞分離、鑒定實驗研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2008年

本文編號：2641818