【摘要】：基因治療是指將遺傳物質(zhì)導(dǎo)入患者體內(nèi)，以使患者獲得治療的一種新型治療方式。要獲得理想的臨床治療效果，，必須實(shí)現(xiàn)靶向性基因治療。根據(jù)基因治療的原理及過(guò)程，其靶向性包括以下三個(gè)方面：治療基因轉(zhuǎn)移的組織特異性、轉(zhuǎn)移基因整合的特異性及轉(zhuǎn)移基因的適宜表達(dá)。目前，一些實(shí)驗(yàn)室通過(guò)改造基因治療載體結(jié)構(gòu)等基因工程手段獲得靶向性治療已取得進(jìn)展�；蛟恍迯�(fù)策略是一種直接的基因療法，它針對(duì)基因缺陷部位進(jìn)行修復(fù)，保持了基因原有的染色質(zhì)環(huán)境，因此是一種理想的靶向性基因治療方式。同源重組雖然可以實(shí)現(xiàn)缺陷基因的原位替換，而且利用正負(fù)篩選的方法可提高ES細(xì)胞中同源重組的效率，但同源重組在哺乳動(dòng)物體細(xì)胞中發(fā)生的效率極低(10~(-5)-10~(-6))，正負(fù)篩選也不適用于體細(xì)胞，對(duì)于體細(xì)胞的基因治療而言無(wú)實(shí)際應(yīng)用的價(jià)值。 RNA／DNA嵌合寡核苷酸介導(dǎo)的嵌合體修復(fù)術(shù)是近年來(lái)發(fā)展的一項(xiàng)新技術(shù)。這項(xiàng)技術(shù)的創(chuàng)立是根據(jù)RNA可提高同源配對(duì)效率的發(fā)現(xiàn)，合成出了被稱為嵌合體的RNA／DNA雜合寡核苷酸分子，將其導(dǎo)入細(xì)胞后，嵌合體可有效地與基因組中同源序列相配對(duì)，并在靶位點(diǎn)處形成錯(cuò)配堿基對(duì)，體內(nèi)修復(fù)機(jī)制能以導(dǎo)入的RNA／DNA寡核苷酸為模板，修改基因組中的同源序列，從而實(shí)現(xiàn)基因的定點(diǎn)糾錯(cuò)。嵌合修復(fù)的效率比同源重組的效率可高10~3-10~6倍，在細(xì)胞及整體動(dòng)物中都有成功的報(bào)道。 最近在應(yīng)用細(xì)胞抽提物系統(tǒng)對(duì)嵌合體修復(fù)術(shù)的機(jī)制研究中發(fā)現(xiàn)，嵌合體的兩條鏈在定點(diǎn)糾錯(cuò)反應(yīng)中發(fā)揮的作用不同，DNA鏈具有引發(fā)糾錯(cuò)反應(yīng)的功能，而摻有RNA的嵌合鏈不具備糾錯(cuò)功能。據(jù)此發(fā)現(xiàn)一種帶有硫代修飾末端的單鏈DNA的糾錯(cuò)效率比初始設(shè)計(jì)的嵌合體高3-4倍，若單鏈DNA寡核苷酸能用于體細(xì)胞的定點(diǎn)糾錯(cuò)，則有望獲得更高的基因定點(diǎn)糾錯(cuò)的效率，以便應(yīng)用于由點(diǎn)突變引起的人類(lèi)遺傳性疾病的基因治療。 為了快速、準(zhǔn)確地測(cè)定定點(diǎn)糾錯(cuò)事件的發(fā)生，以便確定各種打靶分子的定點(diǎn)糾錯(cuò)的功能，我們?cè)O(shè)計(jì)了哺乳動(dòng)物細(xì)胞—定點(diǎn)糾錯(cuò)熒光報(bào)告系統(tǒng)。其過(guò)程是將定點(diǎn)突變的
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2001
【分類(lèi)號(hào)】：R346;Q789;R556

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 湯富酬,韓嶸,薛友紡;RNA/DNA嵌合分子介導(dǎo)的高效基因修復(fù)[J];遺傳;2000年04期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前3條

1 李竹紅;用轉(zhuǎn)座子與RNA/DNA嵌合寡核苷酸探討靶向性基因治療[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2000年

2 吳雪松;單鏈寡核苷酸介導(dǎo)基因定點(diǎn)修復(fù)的作用機(jī)制研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2003年

3 楊宇明;膀胱癌干（起始）細(xì)胞分離、鑒定實(shí)驗(yàn)研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2008年

本文編號(hào)：2641818