【摘要】： 漢坦病毒主要引起腎綜合征出血熱（HFRS），對其結(jié)構(gòu)蛋白的免疫學 研究表明，病毒糖蛋白（GP）和核蛋白（NP）都與保護性免疫有關(guān)，其中 囊膜糖蛋白可刺激機體產(chǎn)生中和抗體，但其免疫原性較弱；NP的免疫原性 最強，它誘生免疫保護的機制被認為與其可刺激機體產(chǎn)生細胞免疫應答有 關(guān)。本室前期研究工作證明其抗原位點主要集中在S基因編碼區(qū)5'端約 0.7Kb片段的編碼蛋白上。進一步深入研究兩種結(jié)構(gòu)蛋白的相互關(guān)系并使 之優(yōu)勢互補，，是HFRS基因工程疫苗的基礎(chǔ)研究中亟待解決的問題。 本研究首先將漢坦病毒76-118株M基因G1糖蛋白編碼區(qū)（G1）與 S基因5'端約700bp片段（S0.7）進行拼接，構(gòu)建了原核嵌合表達載體 pGEX-4T-2-G1S0.7和pGEX-4T-2-S0.7G1，分別轉(zhuǎn)化入大腸桿菌中誘導表 達，均獲得預期大小的可與抗?jié)h坦病毒NP抗體結(jié)合的融合蛋白，其中 第四軍醫(yī)大學博士學位論文 一 GISO刀的表達產(chǎn)物還可檢測到微弱的糖蛋白結(jié)合活性，且免疫印跡結(jié)果顯 示其降解明顯少于SO．7GI的表達產(chǎn)物。 進一步構(gòu)建了分別含 SO．7、GI、GISO．7或SO．7GI嵌合基因的重組桿 狀病毒。間接免疫熒光、ELISA和免疫印跡檢測證明，含SO．7片段的三種 重組桿狀病毒均在昆蟲細胞中表達出相應的活性蛋白。其中GISO．7融合蛋 白可同時被抗?jié)h坦病毒NP及糖蛋白GI特異性單抗所識別，免疫印跡結(jié)果 顯示該蛋白分子量與預期完整融合蛋白大小相一致；而 SO廠GI的表達產(chǎn)物 僅檢測到與抗?jié)h坦病毒 Np抗體的結(jié)合活性，且免疫印跡結(jié)果表明未獲得 完整融合蛋白。動物實驗結(jié)果表明含 GI基因片段的重組桿狀病毒也表達 出有生物學活性的糖蛋白。 用 SO．7、GI、GISO．7三種基因的昆蟲細胞表達產(chǎn)物分別免疫小鼠， 間接免疫熒光、ELISA、微量細胞培養(yǎng)中和試驗及T淋巴細胞增殖試驗檢 測兔疫效果。結(jié)果表明，幾種重組桿狀病毒的表達產(chǎn)物在機體內(nèi)均可刺激 產(chǎn)生針對漢坦病毒的特異性體液免疫及細胞免疫應答。其中GISO．7刺激產(chǎn) 生的抗體滴度最高，且可刺激機體同時產(chǎn)生特異性的抗?jié)h坦病毒NP及GP 的抗體：各免疫組小鼠均有部分產(chǎn)生中和抗體：淋巴細胞增殖試驗表明， GI SO．7免疫組小鼠脾細胞對 NP及 GP的增殖反應指數(shù)高于陰性對照組， 并略高于 GI或 SO．7免疫組小鼠脾細胞的增殖反應指數(shù)。 以上研究證明，將漢坦病毒 76－118株 S基因編碼區(qū) 5’端約 0．7Kb片段 與 M基因 GI編碼區(qū)進行拼接，構(gòu)建的含 GI SO．7嵌合基因之重組桿狀病 毒可在昆蟲細胞中表達出有生物學活性的完整融合蛋白。該表達產(chǎn)物同時 具備兩種基因片段編碼蛋白的特點，在小鼠體內(nèi)既可誘導體液免疫又可誘 導細胞免疫應答，且免疫效果優(yōu)于 G！和 SO．7。本研究為 HFRS基因工程 疫苗研制中選擇合適的免疫組分提供了重要的理論和實驗依據(jù)。
【學位授予單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2001
【分類號】：R392

【引證文獻】

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1 胡剛;吳興安;王海濤;李璞媛;徐志凱;張芳琳;;漢坦病毒CTL多表位重組腺病毒的構(gòu)建及免疫學分析[J];科學技術(shù)與工程;2010年32期

2 胡剛;白文濤;吳興安;王海濤;徐志凱;張芳琳;;漢坦病毒嵌合基因G2S0.7與CTL多表位重組腺病毒的構(gòu)建及免疫學分析[J];細胞與分子免疫學雜志;2010年11期

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1 劉勇;漢灘病毒76-118株G1S0.7和G2S0.7不同嵌合基因的表達及免疫學特性研究[D];中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學;2003年

本文編號：2635549