【摘要】：為探討免疫效應(yīng)分子基因的表達(dá)與移植腎急性排斥的關(guān)系，本研究采用競(jìng)爭(zhēng) 性PCR的方法定量檢測(cè)Fas、FasL、GB、P和T1A－1mRNA水平。為此設(shè)計(jì)一 多特異性競(jìng)爭(zhēng)性?xún)?nèi)參照模板，這一模板包含上述5種基因和β－actin基因特異性 引物的 5’和 3’序列，克隆在載體PKF_3上。首先檢測(cè)移植腎組織免疫效應(yīng)分子基 因的表達(dá)，42例標(biāo)本分為急性排斥（14例）、慢性排斥（15例）和無(wú)排斥（13 例）三組。梯度稀釋的競(jìng)爭(zhēng)性?xún)?nèi)參照分別與一定量逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物共同擴(kuò)增，瓊脂糖 凝膠電泳檢測(cè)，比較兩種PCR產(chǎn)物的積分吸光度A，判斷初始加入的靶cDNA 量。結(jié)果顯示各組Fas表達(dá)相似；急性排斥組FasL、GB、P和T1A－1水平明顯 高于慢性排斥組和無(wú)排斥組，慢性排斥組和無(wú)排斥組間多無(wú)顯著差異；急性排斥 標(biāo)本基因表達(dá)與病理?yè)p害嚴(yán)重程度有關(guān)。表明多數(shù)基因轉(zhuǎn)錄物的增加與移植腎急 性排斥密切相關(guān)，綜合判斷可大大提高急性排斥診斷的準(zhǔn)確性。進(jìn)一步，分離腎 移植患者外周血淋巴細(xì)胞，RT－PCR定量，觀察除Fas外的四種免疫效應(yīng)分子 mRNA水平變化，發(fā)現(xiàn)其表達(dá)模式與移植腎組織的檢測(cè)結(jié)果接近，而采集外周 血既方便，又對(duì)移植腎無(wú)創(chuàng)傷。在此基礎(chǔ)上，通過(guò)系列標(biāo)本的測(cè)定，證明移植前 后外周血淋巴細(xì)胞基因表達(dá)出現(xiàn)一定程度的上調(diào)，急性排斥前逐漸升高，至抗排 斥治療時(shí)達(dá)峰值，用藥后迅速下降，且基因表達(dá)的變化早于移植腎形態(tài)學(xué)改變和 腎功能減退的出現(xiàn)。最后，采用免疫組化技術(shù)檢測(cè)移植腎組織5種免疫效應(yīng)分子 基因表達(dá)產(chǎn)物，，陽(yáng)性著色主要位于腎小管上皮細(xì)胞和間質(zhì)浸潤(rùn)細(xì)胞。急性排斥組 表達(dá)明顯強(qiáng)于慢性和無(wú)排斥組（Fas例外），病理?yè)p害嚴(yán)重者，陽(yáng)性強(qiáng)度亦高， 從而在蛋白質(zhì)水平上驗(yàn)證了移植腎組織和外周血淋巴細(xì)胞基因水平的檢測(cè)結(jié)果。 本研究表明，CTL活化是移植腎急性排斥的重要特征，其活化標(biāo)志物──FasL、 TIA－1、GB和P四種免疫效應(yīng)分子在mRNA水平上的表達(dá)反映了CTL介導(dǎo)的靶 細(xì)胞損害，基因的上調(diào)與急性排斥密切相關(guān)。我們的工作為建立一系列特異、無(wú) 創(chuàng)傷、極早期的急性排斥診斷方法和免疫狀態(tài)的監(jiān)視途徑奠定了基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2001
【分類(lèi)號(hào)】：R699.2;R392.4

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本文編號(hào)：2620686