發(fā)布時(shí)間：2020-03-31 16:15

【摘要】： 本課題是在本室自己建株的脾基質(zhì)細(xì)胞系的基礎(chǔ)上開展的，建立了一套穩(wěn)定的研究基質(zhì)細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞(DC)的相互作用的實(shí)驗(yàn)體系。課題的展開和深入是在明確的細(xì)胞學(xué)現(xiàn)象的基礎(chǔ)上逐步實(shí)施的。 脾臟是機(jī)體最大的外周免疫器官，也是最重要的免疫器官之一。外周免疫器官是機(jī)體免疫應(yīng)答發(fā)生的場所，可以推測外周免疫器官特殊的微環(huán)境為免疫應(yīng)答的進(jìn)行提供了良好的條件。脫離基質(zhì)微環(huán)境的影響而研究和談?wù)撁庖呒?xì)胞在應(yīng)答后的命運(yùn)歸宿，所得到的結(jié)論不可能反映在體的真實(shí)情況。因此在基質(zhì)微環(huán)境中研究免疫細(xì)胞的生物學(xué)功能更具有生理意義。體外長期培養(yǎng)建立的脾基質(zhì)細(xì)胞永久細(xì)胞系，其組成可能有別于體內(nèi)脾臟微環(huán)境中的基質(zhì)細(xì)胞組分，但可以模擬體內(nèi)基質(zhì)微環(huán)境的部分功能。因此，我們建立了脾臟基質(zhì)細(xì)胞系MSSC-1，并通過生物學(xué)特性的鑒定來推測其在體內(nèi)可能發(fā)揮的某些功能。 MSSC-1是來源于C57BL／6(H-2K~b)小鼠脾臟的一株上皮樣基質(zhì)細(xì)胞。從脾臟的組織結(jié)構(gòu)和功能分析，脾基質(zhì)對淋巴細(xì)胞和抗原提呈細(xì)胞及免疫應(yīng)答過程可能都有一定的調(diào)控作用。從MSSC-1細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子和趨化因子的類型分析，我們可以對MSSC-1的功能做一個初步的推測。 IL-7是淋巴細(xì)胞發(fā)育過程中最重要的細(xì)胞因子之一，在T，B細(xì)胞早期發(fā)育過程中起著非常重要的作用。如在造血器官損傷后(如放射性損傷)脾臟和肝臟在一定程度上可以恢復(fù)造血功能，在造血和免疫功能的重建中，是否存在T、B細(xì)胞的胸腺外和骨髓外發(fā)育呢?脾基質(zhì)分泌IL-7是否與此有關(guān)呢? 干細(xì)胞因子(SCF)是一種早期造血生長因子，主要功能是促進(jìn)造血干細(xì)胞的增殖，其受體主要分布于早期的造血前體細(xì)胞表面和肥大細(xì)胞表面。SCF可以與多種造血生長因子發(fā)揮協(xié)同作用，如EPO，G-CSF，GM-CSF，IL-3，IL7。SCF與IL-7聯(lián)合可以刺激胎兒胸腺細(xì)胞和前B細(xì)胞增殖。與人類不同，小鼠的脾臟具有終生造血活性，即在成年小鼠脾臟內(nèi)仍含有一定數(shù)量的造血前體細(xì)胞，因此，脾臟微環(huán)境中肯定具有某些能維持干細(xì)胞長期存活的造血生長因子，MSSC-1細(xì)胞株表達(dá)一定水平的SCF，這在一定程度上闡明了小鼠脾臟具有終生造血功能的一個內(nèi)在機(jī)制，也提示MSSC-1細(xì)胞可能具有一定的造血支持作用。 第二軍醫(yī)大學(xué)傅士學(xué)位論文 巨噬細(xì)胞集落刺激因子（M、CSF）是造血前體細(xì)胞和單核細(xì)胞向巨噬細(xì)胞定向分化 的最重要的細(xì)胞因子之一，能特異性的促進(jìn)巨噬細(xì)胞集落的形成，并能維持巨噬細(xì)胞 的存活。M－CSF還能抑制巨噬細(xì)胞MHC－11分子的表達(dá)。MSSC．1高表達(dá)M．CSF，可 以推測，此細(xì)胞可能對單核類細(xì)胞的功能和生物學(xué)特性具有一定的調(diào)節(jié)能力。 MSSC－1也表達(dá)高水平的轉(zhuǎn)化的生長因子－p（TGF－p）和血管內(nèi)皮生長因子 （VEGF），這是目前比較確定的兩種具有免疫抑制作用的細(xì)胞因子。TGF－p能顯著抑 制T細(xì)胞的增殖和活化，并能抑制巨噬細(xì)胞MHC－11類分子的表達(dá)；VEGF能抑制DC 的成熟。這兩種抑制性細(xì)胞因子在基質(zhì)細(xì)胞中的表達(dá)提示某些基質(zhì)細(xì)胞對單核巨噬細(xì) 胞系統(tǒng)可能具有一定的負(fù)向調(diào)節(jié)作用。 趨化因子（Chemokine s）在免疫系統(tǒng)中起著極其重要的作用，可能是抗原提呈細(xì)胞 （APC）和淋巴細(xì)胞定向移動的始動因素。兔疫細(xì)胞在正常機(jī)體都有其自然分布，未 成熟的兔疫細(xì)胞存在于中樞兔疫器官（胸腺和骨髓），成熟后則釋放進(jìn)入外周血，然 后定居到外周兔疫器宮（如脾臟，淋巴結(jié)和其它淋巴樣組織）。當(dāng)外部抗原侵入機(jī)體 時(shí)（如皮膚損傷），非成熟的抗原提呈細(xì)胞（如單核細(xì)胞）受到抗原入侵部位的細(xì)胞 分泌的趨化因子的趨化而聚集到抗原部位攝取抗原并處理加工，在處理抗原的同時(shí)進(jìn) 一步成熟，表現(xiàn)為共刺激分子的高表達(dá)和趨化因子受體的改變，有利于向二級兔疫器 官遷移并向T細(xì)胞提呈抗原信號。其中CCR7和CXCR4是成熟DC相對特異的趨化因 子受體，其主要的配體為MD－鄧和 SDF－1。MSSC－1在正常狀態(tài)下就表達(dá)較高水平的 MIP、3 p和SDF－la，因此其對成熟DC可能具有較強(qiáng)的趨化作用。而經(jīng)LPS刺激后 MIP－鄧和 SDF－la的水平逐漸減弱，而MIP－lp，MIP－3a，MIP4Fracktalkine顯著升 高，可能都與機(jī)體對免疫系統(tǒng)的整體調(diào)節(jié)有關(guān)，使免疫應(yīng)答能夠有效的激發(fā)并能及時(shí) 得以控制，以避兔對機(jī)體造成免疫損傷。 綜合MSSC－正的趨化因子和細(xì)胞因子表達(dá)譜推測，MSSC－1細(xì)胞可能具有以下功 能： 1．定向誘導(dǎo)造血前體細(xì)胞的分化； 2．趨化并瓢附單核細(xì)胞或樹突狀細(xì)胞，并能進(jìn)一步影響其功能。 由造血干細(xì)胞到DC的分化發(fā)育，，在不同的免疫器官可能有著不同的分化途徑，產(chǎn) 生不同的終末細(xì)胞或細(xì)?
【圖文】：

圖1.1Mssc一l的光鏡下形態(tài)和超微結(jié)構(gòu)(l，培養(yǎng)初期的基質(zhì)細(xì)胞形態(tài)xl00;2，MSSC一l光鏡下形態(tài)xl00;3，MSSC一l的胞內(nèi)超微結(jié)構(gòu)x3，000;4，MSSC一l之間形成的粘著斑x20，000)Figurel.lThemorphologyandultrastrUetureofMSSC一l(l，themorphologyofstromaleellsinearly一stageeultUrexl00:2，themorphologyofMSSC一1xl003，theultrastruetureofMSSC一1x3，000:4，thezonulaadherensbetweenMSSC一1x20，000)

2.3造血前體細(xì)胞定向分化來的樹突樣細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)透射電鏡超微結(jié)構(gòu)顯示，經(jīng)MSSC一1定向誘導(dǎo)形成的樹突樣細(xì)胞具有豐富的線粒體，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體，偶爾可見溶酶體，未見其它功能性顆粒(圖2.3)。其超微結(jié)構(gòu)與經(jīng)典樹突狀細(xì)胞結(jié)構(gòu)類似。圖2.3造血前體細(xì)胞定向分化來的樹突樣細(xì)胞的超微結(jié)構(gòu)Figure2.3TheultrastruetureofDC一likeeellsdifferentiatedfromhematoPoeticProgenitors2.4吞噬試驗(yàn)經(jīng)FACS檢測發(fā)現(xiàn)，造血前體細(xì)胞經(jīng)MSSC一1定向誘導(dǎo)產(chǎn)生的樹突樣細(xì)胞對OVA-FITC具有很強(qiáng)的吞噬能力，吞噬能力高于成熟的DC(圖2.4)。圖2.4MMC一1誘導(dǎo)的樹突樣細(xì)胞的吞噬能力Figure2.4TheeaPabilitytouPtakeOVA一FITCofDC一l議eeellsinducedbyMSSC一1(A，matureDC;B，DC一1止eeellsindueedbyMSSC一l)2.5同種異體混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(Ano一MLR)同種異體混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)主要是由于刺激細(xì)胞中抗原提呈細(xì)胞上表達(dá)的MHC一n及共刺激分子能直接刺激同種異體T細(xì)胞的增殖，T細(xì)胞反應(yīng)的強(qiáng)弱與共刺激分子的豐度關(guān)系很大，共刺激分子表達(dá)越高，其對同種異體淋巴細(xì)胞的刺激能力越強(qiáng)。成熟DC由于其表達(dá)高豐度的MHC一11和多種共刺激分子，因此其對同種異體淋巴細(xì)胞具有很強(qiáng)的刺激能力
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2002
【分類號】：R392

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 敖俊紅,楊蓉婭,王文嶺;單純皰疹病毒2型對單一核細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子的影響[J];中華皮膚科雜志;2002年04期

2 敖俊紅;楊蓉婭;王文嶺;周禮義;陳興平;;單純皰疹病毒2型對單一核細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子的影響(英文)[J];Chinese Journal of Sexually Transmitted Infections;2003年01期

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1 唐華;內(nèi)皮型脾臟基質(zhì)細(xì)胞誘導(dǎo)造血干細(xì)胞分化為調(diào)節(jié)性樹突狀細(xì)胞[D];浙江大學(xué);2005年

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3 董少忠;一個HSV-1刺激相關(guān)基因的克隆及其功能的初步分析[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2003年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前2條

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2 王小茜;CD11c~(int)CD45RB~(hi)DCreg及一群新型IL-10分泌型巨噬細(xì)胞的體內(nèi)外鑒定[D];內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué);2013年

本文編號：2609296