【摘要】：目的： 1.模仿胸主動(dòng)脈瘤、胸腹主動(dòng)脈瘤修復(fù)術(shù)對(duì)脊髓血供的影響,建立一個(gè)貼近臨床實(shí)際工作、操作較為簡(jiǎn)單、可重復(fù)性較高、延遲性癱瘓發(fā)生率較高、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物死亡率較低、存活時(shí)間較長(zhǎng)的大鼠脊髓缺血后延遲性癱瘓的動(dòng)物模型,探討導(dǎo)致延遲性癱瘓的主要危險(xiǎn)因素。 2.觀察延遲性癱瘓大鼠脊髓的病理改變,探討脊髓缺血后延遲性癱瘓可能的發(fā)生機(jī)制。 3.依據(jù)本研究提出的脊髓缺血后延遲性癱瘓可能的發(fā)病機(jī)制,進(jìn)行治療,觀察治療效果,并對(duì)本研究關(guān)于脊髓缺血后延遲性癱瘓發(fā)病機(jī)制的假說(shuō)加以驗(yàn)證。 方法： 1.選取SD大鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物,模擬胸、胸腹主動(dòng)脈瘤修復(fù)術(shù),開胸后在左鎖骨下動(dòng)脈與降主動(dòng)脈交匯處以無(wú)創(chuàng)血管夾阻斷降主動(dòng)脈,造成腰段脊髓缺血。按照阻斷降主動(dòng)脈時(shí)體溫和不同的阻斷時(shí)間,將大鼠分組。觀察各組大鼠延遲性癱瘓發(fā)生率、生存率、生存時(shí)間；觀察降主動(dòng)脈阻斷時(shí)間、阻斷時(shí)大鼠的體溫對(duì)延遲性癱瘓的影響。 2.選擇在33.0±0.5攝氏度下阻斷降主動(dòng)脈40min的大鼠與假手術(shù)組大鼠為研究對(duì)象。觀察解除降主動(dòng)脈阻斷后6小時(shí)、30小時(shí)、48小時(shí),大鼠腰膨大段脊髓Nissl染色、免疫熒光雙標(biāo)、REAL-TIMEPCR檢測(cè)結(jié)果。 3.選擇在33.0±0.5攝氏度下阻斷降主動(dòng)脈40min大鼠和假手術(shù)組大鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象。接受降主動(dòng)脈阻斷的大鼠,按照是否使用小膠質(zhì)細(xì)胞抑制劑米諾環(huán)素及米諾環(huán)素的不同劑量,分為生理鹽水組、米諾環(huán)素30mg/kg組、米諾環(huán)素90mg/kg組。觀察各組大鼠術(shù)后各時(shí)間點(diǎn)BBB評(píng)分、大鼠的生存率與存活時(shí)間。 研究結(jié)果： 1.在接受降主動(dòng)脈阻斷的各組大鼠中,在33.0±0.5攝氏度下阻斷降主動(dòng)脈40min組大鼠,其延遲性癱瘓發(fā)生率較高(73%)；死亡率不隨延遲性癱瘓發(fā)生率升高而升高。在低溫下、常溫下均存在一個(gè)導(dǎo)致術(shù)后發(fā)生延遲性癱瘓的阻斷降主動(dòng)脈時(shí)間窗。常溫下的時(shí)間窗為10-11.5min,低溫下的時(shí)間窗為18-40min。 2.大鼠在33.0±0.5攝氏度下接受降主動(dòng)脈阻斷40min后,觀察腰膨大段脊髓病理改變。Nissl染色顯示,在解除阻斷后6小時(shí),與假手術(shù)組比較,腰膨大段脊髓前角運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元并無(wú)明顯減少,其差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P0.05；而在解除阻斷后30小時(shí),出現(xiàn)運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元數(shù)目減少,與假手術(shù)組其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P0.05；在解除阻斷后48小時(shí),運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元數(shù)目進(jìn)一步減少,可見大片運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元壞死后的空泡,運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元數(shù)目少于假手術(shù)組與解除阻斷后30小時(shí)組,其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P0.05。免疫熒光雙標(biāo)顯示,Ibal、IL-1β、IL-6,在解除阻斷后6小時(shí),與假手術(shù)組比較,其灰度值差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P0.05；而在解除阻斷后30小時(shí),與假手術(shù)組比較,其灰度值均升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P0.05；IL-1β與Ibal、IL-6與Ibal共表達(dá)。REAL-TIME PCR檢測(cè)顯示,在解除阻斷后30小時(shí),IL-1β與IL-6mRNA的表達(dá)均高于假手術(shù)組,其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P0.05。 3.在解除降主動(dòng)脈阻斷后1小時(shí),予以米諾環(huán)素90mg/kg組大鼠,其術(shù)后30、36、48、60、72小時(shí)下肢運(yùn)動(dòng)功能的BBB評(píng)分高于予以生理鹽水組大鼠,其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P0.05；而予以米諾環(huán)素30mg/kg組大鼠,在術(shù)后30、36、48、60、72小時(shí)BBB評(píng)分與生理鹽水組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P0.05。各組大鼠術(shù)后生存率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P0.05。 實(shí)驗(yàn)結(jié)論： 1.在33.0±0.5攝氏度下阻斷SD大鼠降主動(dòng)脈40min,可以建立一個(gè)延遲性癱瘓發(fā)生率較高、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物死亡率較低、生存時(shí)間較長(zhǎng)、與臨床胸、胸腹主動(dòng)脈瘤修復(fù)術(shù)較為接近的脊髓缺血后延遲性癱瘓動(dòng)物模型。降主動(dòng)脈阻斷時(shí)間與阻斷時(shí)溫度是決定大鼠術(shù)后是否會(huì)發(fā)生延遲性癱瘓的兩個(gè)重要因素。低溫與常溫下均存在一個(gè)導(dǎo)致延遲性癱瘓發(fā)生的時(shí)間窗,當(dāng)降主動(dòng)脈阻斷時(shí)間位于時(shí)間窗內(nèi)時(shí),部分大鼠術(shù)后會(huì)發(fā)生延遲性癱瘓；阻斷時(shí)間越接近時(shí)間窗上限,延遲性癱瘓發(fā)生率越高；低溫可以提高這一時(shí)間窗的下限,擴(kuò)大這一時(shí)間窗的窗口期。 2.復(fù)溫后小膠質(zhì)細(xì)胞逐步激活,激活的小膠質(zhì)細(xì)胞及其所釋放的炎性因子IL-1β、IL-6,可能是導(dǎo)致脊髓缺血后延遲性癱瘓發(fā)生的機(jī)制之一。 3.小膠質(zhì)細(xì)胞抑制劑米諾環(huán)素能在一定程度上避免脊髓缺血后延遲性癱瘓的發(fā)生。圖26幅,表7個(gè),參考文獻(xiàn)173篇。
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R651.2;R-332

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2606426