【摘要】： 單純皰疹病毒胸苷激酶(HSV-tk)基因是腫瘤基因治療研究中常用的自殺基因,為達(dá)到安全有效的治療目的,需要調(diào)控HSV-tk基因在腫瘤細(xì)胞內(nèi)精確地表達(dá),從而防止基因過表達(dá)對(duì)機(jī)體產(chǎn)生危害,低表達(dá)影響治療效果。 本研究利用基因重組技術(shù)構(gòu)建了四環(huán)素調(diào)控HSV-tk基因表達(dá)的雙質(zhì)粒載體系統(tǒng),在此基礎(chǔ)之上又構(gòu)建了四環(huán)素調(diào)控HSV-tk基因表達(dá)的單質(zhì)粒載體系統(tǒng)。體外細(xì)胞水平研究結(jié)果表明構(gòu)建的四環(huán)素調(diào)控HSV-tk的雙載體系統(tǒng)可有效調(diào)控HSV-tk基因在宮頸癌HeLa細(xì)胞表達(dá)及抗腫瘤活性;構(gòu)建的四環(huán)素調(diào)控HSV-tk的單載體系統(tǒng)可有效地調(diào)控HSV-tk基因在HeLa細(xì)胞及結(jié)腸癌HCT-8細(xì)胞內(nèi)表達(dá),并可調(diào)控其抗腫瘤活性. 本研究構(gòu)建的四環(huán)素單質(zhì)粒基因表達(dá)調(diào)控系統(tǒng)與四環(huán)素雙質(zhì)粒基因表達(dá)調(diào)控系統(tǒng)比較,具有基因轉(zhuǎn)染操作簡(jiǎn)便、節(jié)省時(shí)間和經(jīng)濟(jì)成本等優(yōu)點(diǎn);同時(shí)單質(zhì)粒調(diào)控系統(tǒng)是一個(gè)自我調(diào)節(jié)基因表達(dá)的調(diào)控載體,能使HSV-tk基因有一定的基礎(chǔ)表達(dá),比雙載體系統(tǒng)啟動(dòng)基因表達(dá)所需時(shí)間短、強(qiáng)力霉素所需濃度低,以及調(diào)控基因表達(dá)時(shí)間長(zhǎng)。這些特點(diǎn)使其更適用于腫瘤的基因治療。 本研究成功構(gòu)建了四環(huán)素調(diào)控HSV-tk基因表達(dá)的雙載體系統(tǒng)及單載體系統(tǒng),為進(jìn)一步提高HSV-tk基因腫瘤治療的安全性及有效性奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
【圖文】：

- TetO2酶切產(chǎn)物經(jīng) 1％瓊脂. 未酶切的 pMD18- TetO2質(zhì). 酶切的 pMD18- TetO2質(zhì)粒. Marker I1% agarose gel electrophires products of pMD18- TetO2pMD18- TetO2plasmidpMD18- TetO2plasmid digesDNA Marker I

3 pcDNA3.1-TetO2酶切鑒定產(chǎn)物電泳1. pcDNA3.1 質(zhì)粒2. pcDNA3.1 質(zhì)粒酶切產(chǎn)物3 .DNA Marker III4. pcDNA3.1-TetO2質(zhì)粒5. pcDNA3.1-TetO2質(zhì)粒酶切產(chǎn)物Fig1.3 1% agarose gel electrophiresis stion products of pcDNA3.1-TetO2plasLane 1．pcDNA3.1 plasmidLane 2．pcDNA3.1 plasmid digestion pLane 3．DNA Marker IIILane 4．pcDNA3.1-TetO2plasmidLane 5．pcDNA3.1-TetO2digestion pro
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：R346

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本文編號(hào)：2587033