【摘要】： 目的: 利用納米氫氧化鋁佐劑輔佐高致病性禽流感H5N1(Highly pathogenic avian influenza virus,HPAIV H5N1)快速提早、提高抗體水平,降低目前使用普遍的油佐劑苗對(duì)機(jī)體胴體品質(zhì)降低影響。 方法: 1.采用微乳液法制備經(jīng)過激光粒度儀測(cè)定,在高壓均質(zhì)過程中選第三和第四循環(huán)的產(chǎn)物,進(jìn)行激光粒度儀測(cè)定。 2.通過測(cè)定濁度、pH值和粒徑三項(xiàng)指標(biāo),對(duì)比121℃,30min高溫高壓滅菌處理NAHA(nanoparticulated aluminum hydroxide aojuvant,NAHA)前后的變化,評(píng)價(jià)納米氫氧化鋁佐劑滅菌方式。 3.用哈爾濱獸醫(yī)研究所制苗用HPAIV(H5N1)尿囊液自制油苗、兩種粒徑納米鋁佐劑苗,即油苗組、NP80組、NP219組,分別右側(cè)(左側(cè)為對(duì)照,不注射任何物質(zhì))胸肌注射相應(yīng)疫苗和對(duì)照組進(jìn)行比較,在14日齡,17日齡,19日齡,21日齡,24日齡,28日齡,31日齡,35日齡,42日齡,49日齡翅靜脈采血按照中華人民共和國農(nóng)業(yè)部規(guī)范的微量血凝抑制實(shí)驗(yàn)測(cè)定HPAIV(H5N1)HA抗體水平;在21日齡,28日齡,35日齡,42日齡心臟采血,淋巴細(xì)胞分離液分離淋巴細(xì)胞,測(cè)定總玫瑰花環(huán)形成率和淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化水平。 4.以納米氫氧化鋁苗(右側(cè)胸肌)、油苗(右側(cè)胸肌)和對(duì)照(相同個(gè)體左側(cè)胸肌)進(jìn)行了眼檢查觀(17日齡,21日齡),病理組織學(xué)和反映炎癥程度的MPO水平(21日齡,35日齡,49日齡)方面的研究,評(píng)價(jià)相應(yīng)佐劑的副作用。 結(jié)果: 1.初步獲得相對(duì)比較穩(wěn)定的平均粒徑與HPAIV(H5N1)病毒顆粒大小接近的80nm和大于此病毒顆粒的219nm的兩種粒徑氫氧化鋁佐劑。 2.在經(jīng)過高溫高壓處理后pH值有輕微的降低,濁度、粒徑大小與處理前差異不顯著,粒徑分布沒有較大的變化。從而證實(shí)NAHA在疫苗的制備過程中可以使用121℃,30min進(jìn)行滅菌處理。 3.納米鋁佐劑苗組21日齡(免疫后7d)表現(xiàn)出迅速提高有效抗體的效果,比油苗組24日齡(免疫后10d)要提前3d,兩組納米佐劑苗之間抗體滴度差異不顯著,兩組納米佐劑苗抗體持續(xù)的時(shí)間不如油苗持久;21日齡、28日齡、35日齡、42日齡玫瑰花環(huán)形成率和淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化率在納米鋁佐劑組、油苗組和對(duì)照組間沒有顯著差異(P＜0.05)。 4.17日齡(免疫后3d)兩個(gè)納米佐劑組刺激性很大,肌肉表現(xiàn)潮紅、水腫,油苗組反應(yīng)相對(duì)較輕,吸收不良,未被吸收乳白色油苗清晰可見;21日齡,兩個(gè)納米鋁佐劑組疫苗基本被吸收殆盡,而油苗組尚有多量未被吸收的淡黃色疫苗痕跡;35日齡,肉眼不易辨別納米鋁和油佐劑的差異。肌肉組織切片H.E染色比較,隨著日齡增長(zhǎng),各組炎癥輕重不同,在21日齡時(shí)兩組納米鋁佐劑組和油苗組炎性細(xì)胞浸潤劇烈,肌纖維間充滿炎性細(xì)胞,肌纖維扭曲變形明顯,注射部位形成炎灶。35日齡時(shí)兩組納米鋁佐劑組炎灶逐漸縮小,而油苗組仍表現(xiàn)很強(qiáng)炎性細(xì)胞聚集。49日齡時(shí)兩組納米鋁佐劑組炎性細(xì)胞已經(jīng)被吸收殆盡,僅在毛細(xì)血管周圍殘存尚未被完全吸收的炎性細(xì)胞;油苗組仍有大量炎性細(xì)胞未被吸收,炎灶明顯。對(duì)照組沒有明顯變化,肌纖維完整。MPO水平測(cè)定發(fā)現(xiàn),隨著日齡的增長(zhǎng)(免疫時(shí)間的延長(zhǎng)),MPO值逐漸降低,在21日齡,35日齡,49日齡兩組納米鋁佐劑組與油苗組差異極顯著(P＞0.01),35日齡兩組納米佐劑組間差異顯著(P＞0.05)。 結(jié)論: 采用微乳液法制備的兩種粒徑納米氫氧化鋁佐劑可以使用高溫高壓(121℃,30min)方式進(jìn)行滅菌處理,即對(duì)濁度、粒徑?jīng)]有顯著影響,pH值有所降低,但是沒有發(fā)生電性的根本轉(zhuǎn)變。納米氫氧化鋁佐劑用做HPAIV(H5N1)的免疫佐劑,在抗體水平測(cè)定中表現(xiàn)出提高HPAIV(H5N1)的抗體水平,比油佐劑苗提前(3d)得到有效抗體應(yīng)答的效果;納米鋁佐劑與油佐劑苗相比還可以在眼觀、組織病理學(xué)、MPO水平三項(xiàng)指標(biāo)中降低佐劑的副作用。 高致病性禽流感(Highly pathogenic avian influenza,HPAI)已經(jīng)在亞洲,非洲,歐洲等地域呈世界范圍內(nèi)流行,引起家禽、野生候鳥乃至人類的死亡。進(jìn)行有效的免疫接種是防制HPAI暴發(fā)、傳播的重要措施之一,目前禽類HPAI(H5N1)防疫工作中使用的疫苗是HPAIV(H5N1)全病毒滅活油佐劑苗,主要抗原成分是血凝素(HA)和神經(jīng)氨酸酶(NA),由于HA能夠誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生有效的中和抗體,從而可以阻止其對(duì)機(jī)體的侵害。眾所周知,在有些抗原中添加佐劑可以提高免疫水平,油佐劑只在動(dòng)物疫苗中使用,其它免疫佐劑研究雖很寬泛,但是由于諸多因素影響在臨床中未獲普遍使用。氫氧化鋁作為廣泛認(rèn)可的且被美國FDA等批準(zhǔn)的佐劑,在疫苗中使用80余年以來,不僅可以提高機(jī)體對(duì)某些抗原的免疫應(yīng)答而且具有可靠的安全性,但是隨著使用時(shí)間的延長(zhǎng),也表現(xiàn)出很多需要改進(jìn)的地方,如:抗體產(chǎn)生時(shí)間慢、抗體水平不高、注射位點(diǎn)的局部強(qiáng)刺激、對(duì)某些抗原無效以及為應(yīng)對(duì)進(jìn)一步開發(fā)新型疫苗如:亞單位疫苗、核酸疫苗等的需要;其詳細(xì)作用機(jī)理、在體內(nèi)的詳細(xì)途徑和如何輔佐更多的抗原(如:百日咳無效)以及進(jìn)一步提高細(xì)胞免疫水平也值得深入研究。抗原進(jìn)入機(jī)體后由于APCs對(duì)所吞噬物質(zhì)的先后選擇性差異,篩選合適大小的粒徑以及評(píng)價(jià)佐劑與抗原配比的最佳量具有重要理論與現(xiàn)實(shí)意義。
【圖文】：

圖5.A:油苗組17日齡箭頭所指為疫苗注射部位沒有吸收的乳白色油苗.B:NP219組17日齡箭頭所指為吸收不完全的淡黃色疫苗殘余物。C:NP80組17日齡箭頭所指為疫苗基本吸收。A:oil.grouP17d~forthevaccinationsitedoesnotabso由theofl而卿whites以xllings.B:NP219-Group17d翻rIOwfornotfuUyabso由此re“Inantsofvaccine.C:NP80-CrouP17d姍wforalmostent此lyabsorbtherelr口antsofv毗ine.圖6.A:油苗組21日齡箭頭所指為疫苗注射部位明顯的淡黃色疫苗殘余物。B:.NP219組21日齡箭頭所指為吸收不徹底的淡黃色疫苗殘余物。C:NP80組21日齡箭頭所指無肉眼可見殘余疫苗。Fig.6.A:oil.groupZld

第4章納米鋁佐劑輔佐AIVHSNI的免疫學(xué)研究圖5.A:油苗組17日齡箭頭所指為疫苗注射部位沒有吸收的乳白色油苗.B:NP219組17日齡箭頭所指為吸收不完全的淡黃色疫苗殘余物。C:NP80組17日齡箭頭所指為疫苗基本吸收。A:oil.grouP17d~forthevaccinationsitedoesnotabso由theofl而卿whites以xllings.B:NP219-Group17d翻rIOwfornotfuUyabso由此re“Inantsofvaccine.C:NP80-CrouP17d姍wforalmostent此lyabsorbtherelr口antsofv毗ine.
【學(xué)位授予單位】：西南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R392

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1 梁存軍;納米鋁佐劑的制備及輔佐HPAIV H5N1的免疫學(xué)研究[D];西南大學(xué);2008年

2 湛琳麗;納米氫氧化鋁吸附禽流感病毒滅活疫苗的研制[D];西南大學(xué);2009年

3 徐愛平;納米鋁佐劑禽流感疫苗（H_5N_1）對(duì)肉雞免疫效力的影響[D];西南大學(xué);2009年

4 祝明;納米鋁佐劑禽流感（H5N1）疫苗對(duì)肉鴨免疫效力的影響[D];西南大學(xué);2009年

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本文編號(hào)：2586225