【摘要】： 霍亂一直是我國(guó)腸道傳染病防治中的重要問(wèn)題。自1961年以來(lái),我國(guó)已經(jīng)經(jīng)歷了三次霍亂流行高峰,近年又出現(xiàn)了O1群霍亂的流行和O139群霍亂的暴發(fā)。分子分型方法是追溯霍亂傳染源,調(diào)查傳播途徑的主要手段,其中以PFGE的應(yīng)用最為廣泛。PulseNet China是以PFGE為核心技術(shù)的病原菌分子分型監(jiān)測(cè)網(wǎng)絡(luò)。本研究對(duì)我國(guó)歷年收集的霍亂弧菌進(jìn)行PFGE分析,建立了第一份有關(guān)我國(guó)40年霍亂流行的分子分型資料,揭示了1961年至今我國(guó)霍亂弧菌分離株的PFGE帶型變化規(guī)律,同時(shí)建立了PulseNet China的霍亂弧菌PFGE帶型數(shù)據(jù)庫(kù),為進(jìn)一步研究我國(guó)霍亂弧菌分離株的進(jìn)化規(guī)律提供了有效數(shù)據(jù)和基礎(chǔ)信息。另外,本研究對(duì)AFLP用于霍亂弧菌分型的分辨力、重復(fù)性進(jìn)行了評(píng)價(jià),確定了AFLP用于霍亂弧菌分型分析的具體方法,并與PFGE進(jìn)行了比較,為PulseNetChina發(fā)展新的分型技術(shù)奠定了實(shí)驗(yàn)和理論基礎(chǔ)。 實(shí)驗(yàn)共選取了1961年-2007年全國(guó)26個(gè)省份分離的1254株O1群霍亂弧菌和517株O139群霍亂弧菌。菌株進(jìn)行PFGE酶切電泳后得到圖譜用BioNumerics軟件處理,進(jìn)行帶型命名,計(jì)算菌株之間的相似性系數(shù),按照相似性系數(shù)進(jìn)行聚類(lèi)分析(UPGMA方法)。NotⅠ酶切電泳將1216株O1群菌株分為722個(gè)不同帶型,平均每種帶型包含1.69株菌;將517株O139肝菌株分為169個(gè)不同帶型,平均每種帶型包含1.33株菌。SfiI酶切電泳將704株O1群菌株分為532個(gè)不同帶型,平均每種帶型包含3.06株菌;將115株O139群菌株分為53個(gè)不同帶型,平均每種帶型包含2.17株菌。各帶型包含菌株數(shù)量多少不均,從1-80株不等。包含菌株數(shù)量最多的前2%的帶型包含了所有菌株的約20%-40%。大部分(70%)菌株具有獨(dú)特的帶型,同時(shí)也有部分帶型在不同年份和(或)不同省份存在。 通過(guò)對(duì)流行不相關(guān)菌株的分辨能力、對(duì)流行可能相關(guān)菌株的分辨能力和對(duì)具有相同核糖體型的菌株的分辨能力的比較,初步確定了NotI和SfiI對(duì)O1群霍亂弧菌的分辨能力均很好,后者略優(yōu)于前者;對(duì)于O139群菌株,NotI的分辨能力明顯優(yōu)于SfiI;聯(lián)合應(yīng)用兩種內(nèi)切酶進(jìn)行PFGE分型可以得到更多的型別,提高分辨能力。結(jié)合酶切效率、實(shí)驗(yàn)費(fèi)用等因素我們建議在對(duì)霍亂弧菌進(jìn)行PFGE分型時(shí),以NotI為首選酶,NotI酶切得到相同帶型的菌株可用SfiI進(jìn)一步分型。 基于NotI酶切結(jié)果,對(duì)740株O1群產(chǎn)毒株進(jìn)行了聚類(lèi)分析,結(jié)果顯示,PFGE帶型隨著年代變遷的現(xiàn)象比較明顯,未發(fā)現(xiàn)PFGE帶型在各地區(qū)之間的差異。1961年分離的菌株帶型比較豐富,多樣性較大;80年代分離菌株和90年代分離菌株相對(duì)保守,兩者可以分為明顯不同的類(lèi);引起2005年流行的菌株與先前菌株差異明顯,可能是一個(gè)新出現(xiàn)的克隆。 基于NotI酶切結(jié)果,對(duì)417株O139群產(chǎn)毒株進(jìn)行了聚類(lèi)分析,分為117個(gè)不同帶型,帶型之間相似度大。并未發(fā)現(xiàn)帶型與菌株分離年份或分離省份之間有明顯的關(guān)聯(lián),也不能根據(jù)聚類(lèi)結(jié)果對(duì)417株O139群菌株進(jìn)行分類(lèi)。 與產(chǎn)毒株相比,非產(chǎn)毒株的PFGE帶型更加豐富,帶型問(wèn)差異更大,在聚類(lèi)圖中分布更加分散,提示非產(chǎn)毒株的基因組結(jié)構(gòu)差異比產(chǎn)毒株大。 本課題還對(duì)AFLP用于霍亂弧菌分型的條件進(jìn)行了初步研究,確定了發(fā)展AFLP成為PulseNet China分子分型技術(shù)的可行性。通過(guò)比較各對(duì)引物針對(duì)47株基因組有差異的霍亂弧菌的分辨力,確定了ApaI/TaqI針對(duì)霍亂弧菌的最佳引物組合為ApaI-T/TaqI-C,HindⅢ/TaqI針對(duì)霍亂弧菌的最佳引物組合為HindⅢ-A/TaqI-A。通過(guò)對(duì)3組內(nèi)切酶分辨力的比較,確定用于霍亂弧菌AFLP分型的最佳內(nèi)切酶及其引物組合為EcoRI-G/MseI-T。同時(shí)進(jìn)行了AFLP和PFGE分型結(jié)果的比較,結(jié)果顯示AFLP單獨(dú)作為一種分型方法的能力不如PFGE,但兩者的分型一致性較好,兩者可以相互補(bǔ)充,聯(lián)合應(yīng)用。
【圖文】：

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【學(xué)位授予單位】：中國(guó)疾病預(yù)防控制中心
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類(lèi)號(hào)】：R378

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 劉延清;霍亂的分子流行病學(xué)[J];海峽預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志;2002年01期

2 劉紅露;張京云;馮澤惠;李偉;崔志剛;章麗娟;祝小平;闞飆;;脈沖場(chǎng)凝膠電泳分型技術(shù)在追溯O139霍亂傳染來(lái)源中的應(yīng)用[J];中華流行病學(xué)雜志;2006年02期

3 段廣才，高守一，祁國(guó)明，劉延清，劉彩蓮，，徐文斌;霍亂弧菌O139國(guó)內(nèi)外菌株分子生物學(xué)特征比較[J];中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志;1994年06期

本文編號(hào)：2576897