【摘要】： 樹突狀細胞(dendritic cells, DC)是體內最重要的抗原提呈細胞,而Wnt信號通路最近被證實在免疫系統(tǒng)中發(fā)揮多種調控作用,本論文是關于DC中Wnt信號通路的一些研究。本實驗從外周血中分離獲得單核細胞,體外加入細胞因子GM-CSF和IL-4誘導培養(yǎng)5天后獲得DC,然后以這種單核細胞來源的DC為研究對象,探討DC中Wnt通路成員表達分泌及其對DC功能的影響。 本實驗首先通過RT-PCR的方法檢測DC中Wnt通路成員的表達情況,結果顯示,在單核細胞向DC的分化過程中始終表達WNT5A配體及Wnt通路多種受體Frz1、Frz2、Frz3、Frz4、LRP6以及ROR2的mRNA,免疫熒光的結果也證實WNT5A分布在DC的整個胞漿。DC中多種Wnt通路成員的表達提示我們Wnt信號通路可能對DC的分化或功能起重要的調控作用。 SB216763可以作為經(jīng)典Wnt通路(Wnt/β-catenin信號通路)的活化劑。本實驗結果顯示,體外加入10μM的SB216763處理2-3 h后,能引起DC中β-catenin的積累活化,而β-catenin信號活化后能引起DC表型的成熟,DC的共刺激分子CD80、CD86及與T細胞作用的功能分子CD40表達的平均熒光強度均明顯增加,幾乎達到成熟DC的水平。但是這種DC在功能上并未成熟,炎性因子IL-1β、IL-6、IL-12 p40、TNF-a及趨化因子受體CCR7的表達遠低于LPS促成熟的DC,甚至低于對照組未成熟DC,因此屬于一種耐受型的DC。 另外,由于DC能分泌WNT蛋白,DC中WNT蛋白的分泌機制以及可溶性差的WNT蛋白在細胞間如何運輸,這些都沒有明確的結論。最近有研究證明,果蠅等模式生物發(fā)育過程中WNT蛋白的分泌需要Wntless和Retromer Complex的協(xié)助。為證明DC中WNT5A的分泌是否也有Wntless和Retromer Complex的參與,本實驗利用RNAi的方法干擾Wntless分子以及Retromer Complex的關鍵亞基Vps35的表達,免疫熒光結果顯示,Wntless和Vps35被干擾后DC細胞膜上WNT5A的分布明顯減少。因此本實驗證明,Wntless和Retromer Complex參與DC中WNT蛋白的分泌過程。
【圖文】：

大部分細胞半懸浮生長(圖IB)。加入LPS促成熟的DC(matureDC，mDC)形態(tài)稍微變圓，突起變少但出現(xiàn)大量毛刺，尖銳的突觸非常明顯，出現(xiàn)一些大的集落(圖IC)。圖中一些非常小而圓的顆粒為混雜的淋巴細胞，其直徑遠小于10一20拜m的DC。

未加一抗;B實驗組，，加WNTSA一抗)圖4免疫熒光檢測DC內WNTSA的分布(x400倍)C通路中表達多種Wnt受體Frz蛋白是Wni通路的主要受體，目前哺乳動物中己鑒定10種Frz受體S/6作為Frz受體的共受體，在經(jīng)典Wni通路中是必不可少的。最近發(fā)酸激酶受體RORZ也可以作為WNT蛋白的受體。利用Rl’-PCR的方法內Wnt通路各種受體的表達情況，結果顯示DC表達有Frzl、FrzZ、、LRP6以及RORZ等多種Wnt受體(圖3)。RORZLRP6F『24
【學位授予單位】：華東師范大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2010
【分類號】：R392

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