發(fā)布時(shí)間：2020-01-24 09:25

【摘要】：目的探討抗血小板膜表面GPIba單克隆抗體,SZ-2、AN51是否能夠誘導(dǎo)血小板凋亡。 方法取健康志愿者的新鮮靜脈血,分離得到富含血小板的血漿(PRP)和洗滌血小板。將洗滌血小板與抗GPIba單克隆抗體SZ-2、AN51(2ug/ml)和陰性對(duì)照組IgG、H1P1(2ug/ml)37°孵育不同的時(shí)間后,用流式細(xì)胞儀檢測(cè)線粒體跨膜電位(△ψm)的去極化水平；Western blot方法檢測(cè)促凋亡蛋白bak和bad、抗凋亡蛋白bcl-xl和bcl-2以及caspase-3蛋白的表達(dá)量水平。 結(jié)果 ①SZ-2、AN51抗體時(shí)間依賴性的誘導(dǎo)△Ψm去極化,結(jié)果顯示將洗滌血小板孵育在不同抗體1-3h陰性組與陽(yáng)性組△Ψm去極化水平無(wú)差別(P0.05),無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；自孵育4h開始,陰性組與陽(yáng)性組△Ψm去極化水平有差別(*P0.05),有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 ②將洗滌血小板孵育在不同抗體6h后,用WB方法測(cè)血小板中促凋亡蛋白與抗凋亡蛋白的表達(dá)。結(jié)果顯示SZ-2、AN51抗體能夠引起血小板促凋亡蛋白Bak、Bad表達(dá)增多,抗凋亡蛋白Bcl-x1、Bcl-2表達(dá)減少；SZ-2抗體能引起Caspase-3蛋白32kd表達(dá)減少,但未或得剪切后17kd條帶。 ③SZ-2.AN51抗體僅是一種微弱刺激,不足以引起血小板PS外翻。 結(jié)論抗血小板膜表面GPIba單克隆抗體,SZ-2、AN51能夠通過(guò)內(nèi)源性途徑引起血小板凋亡,但凋亡幅度較弱。
【圖文】：

ΔΨm 的去極化，但能夠引起真核起始因子（eukaryotic initiation factor，eIF2α）的磷酸化及 caspase-9 蛋白的活化。研究中發(fā)現(xiàn)激動(dòng)劑膠原能引起血小板內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)，表現(xiàn)為 eIF2α 絲氨酸 51 位點(diǎn)的磷酸化，這是凋亡的起始程序，隨后激活caspase-8 蛋白，它的激活能引起 BH3-only 家族蛋白 Bid 的清除，從而促進(jìn)促凋亡蛋白 Bax、Bak 的齊聚與細(xì)胞色素 C 的釋放，最終引起凋亡執(zhí)行者 caspase-3 及 9的活化，導(dǎo)致了血小板的凋亡。膠原參與了血小板的凋亡，但膠原受體在這其中的作用還待進(jìn)一步研究。

圖 1.孵育不同時(shí)間后測(cè)得線粒體膜電位（上述柱狀圖表示至少三次實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的平均值，*表示 P<0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義）2.Western blot 分析凋亡蛋白的結(jié)果根據(jù)流式結(jié)果可知將洗滌血小板短時(shí)間的孵育在抗體中不能引起血小板凋亡，故將洗滌血小板分別與陽(yáng)性組抗血小板 GPIbα 抗體，SZ-2、AN51（濃度均為2ug/ml）和陰性組 H1P1、IgG 抗體充分孵育 6h，后用 WB 方法測(cè)血小板中促凋亡蛋白與抗凋亡蛋白的表達(dá)。結(jié)果顯示（圖 2A）SZ-2 能夠引起血小板促凋亡蛋白Bak、Bad 表達(dá)增多，（圖 2B）抗凋亡蛋白 Bcl-xl、Bcl-2 表達(dá)減少，，（圖 2C）Caspase-3蛋白 32kd 表達(dá)減少，但未或得剪切后 17kd 條帶。同時(shí) AN51 抗體亦能（圖 2D）能夠引起血小板促凋亡蛋白 Bak、Bad 表達(dá)增多，（圖 2E）抗凋亡蛋白 Bcl-xl、Bcl-2表達(dá)減少圖 2A 圖 2B
【學(xué)位授予單位】：蚌埠醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R3416

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2572623