【摘要】：目的探討抗血小板膜表面GPIba單克隆抗體,SZ-2、AN51是否能夠誘導血小板凋亡。 方法取健康志愿者的新鮮靜脈血,分離得到富含血小板的血漿(PRP)和洗滌血小板。將洗滌血小板與抗GPIba單克隆抗體SZ-2、AN51(2ug/ml)和陰性對照組IgG、H1P1(2ug/ml)37°孵育不同的時間后,用流式細胞儀檢測線粒體跨膜電位(△ψm)的去極化水平；Western blot方法檢測促凋亡蛋白bak和bad、抗凋亡蛋白bcl-xl和bcl-2以及caspase-3蛋白的表達量水平。 結果 ①SZ-2、AN51抗體時間依賴性的誘導△Ψm去極化,結果顯示將洗滌血小板孵育在不同抗體1-3h陰性組與陽性組△Ψm去極化水平無差別(P0.05),無統(tǒng)計學意義；自孵育4h開始,陰性組與陽性組△Ψm去極化水平有差別(*P0.05),有統(tǒng)計學意義。 ②將洗滌血小板孵育在不同抗體6h后,用WB方法測血小板中促凋亡蛋白與抗凋亡蛋白的表達。結果顯示SZ-2、AN51抗體能夠引起血小板促凋亡蛋白Bak、Bad表達增多,抗凋亡蛋白Bcl-x1、Bcl-2表達減少；SZ-2抗體能引起Caspase-3蛋白32kd表達減少,但未或得剪切后17kd條帶。 ③SZ-2.AN51抗體僅是一種微弱刺激,不足以引起血小板PS外翻。 結論抗血小板膜表面GPIba單克隆抗體,SZ-2、AN51能夠通過內(nèi)源性途徑引起血小板凋亡,但凋亡幅度較弱。
【圖文】：

ΔΨm 的去極化，但能夠引起真核起始因子（eukaryotic initiation factor，eIF2α）的磷酸化及 caspase-9 蛋白的活化。研究中發(fā)現(xiàn)激動劑膠原能引起血小板內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激反應，表現(xiàn)為 eIF2α 絲氨酸 51 位點的磷酸化，這是凋亡的起始程序，隨后激活caspase-8 蛋白，它的激活能引起 BH3-only 家族蛋白 Bid 的清除，從而促進促凋亡蛋白 Bax、Bak 的齊聚與細胞色素 C 的釋放，最終引起凋亡執(zhí)行者 caspase-3 及 9的活化，導致了血小板的凋亡。膠原參與了血小板的凋亡，但膠原受體在這其中的作用還待進一步研究。

圖 1.孵育不同時間后測得線粒體膜電位（上述柱狀圖表示至少三次實驗數(shù)據(jù)的平均值，*表示 P<0.05，有統(tǒng)計學意義）2.Western blot 分析凋亡蛋白的結果根據(jù)流式結果可知將洗滌血小板短時間的孵育在抗體中不能引起血小板凋亡，故將洗滌血小板分別與陽性組抗血小板 GPIbα 抗體，SZ-2、AN51（濃度均為2ug/ml）和陰性組 H1P1、IgG 抗體充分孵育 6h，后用 WB 方法測血小板中促凋亡蛋白與抗凋亡蛋白的表達。結果顯示（圖 2A）SZ-2 能夠引起血小板促凋亡蛋白Bak、Bad 表達增多，（圖 2B）抗凋亡蛋白 Bcl-xl、Bcl-2 表達減少，，（圖 2C）Caspase-3蛋白 32kd 表達減少，但未或得剪切后 17kd 條帶。同時 AN51 抗體亦能（圖 2D）能夠引起血小板促凋亡蛋白 Bak、Bad 表達增多，（圖 2E）抗凋亡蛋白 Bcl-xl、Bcl-2表達減少圖 2A 圖 2B
【學位授予單位】：蚌埠醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R3416

【共引文獻】

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本文編號：2572623