【摘要】：微小RNA是一類單鏈非編碼RNA,大約20-25個(gè)核苷酸的長(zhǎng)度,在線蟲(chóng)到人類的真核生物中廣泛存在。miRNA具有高度的保守性、組織特異性和時(shí)序性;生成miRNA的基因并不是隨機(jī)分布的,從同一個(gè)前體RNA加工而來(lái)的共表達(dá)miRNA存在基因簇集現(xiàn)象。成熟的miRNA通過(guò)其5’端的5-8個(gè)核苷酸,識(shí)別并與目標(biāo)特異性基因進(jìn)行不完全互補(bǔ)配對(duì)或者完全互補(bǔ)配對(duì),引起目標(biāo)特異性基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的降解或者誘導(dǎo)翻譯抑制,從而來(lái)調(diào)控目的基因的表達(dá)。miRNA通過(guò)上述的作用原理在基因調(diào)控網(wǎng)絡(luò)中發(fā)揮著重要的作用,并且還在對(duì)生物體的個(gè)體發(fā)育、細(xì)胞增值、凋亡、分化以及腫瘤的發(fā)生等許多方面的研究上具有重要的意義。 本課題開(kāi)展miRNA-125a、miRNA-295、miRNA-181b在小鼠著床前胚胎表達(dá)的研究,分析miRNA在著床前胚胎生長(zhǎng)發(fā)育、細(xì)胞分化等方面可能起到的作用。 目的:建立小鼠的超排、交配和胚胎收集系統(tǒng),研究miRNA-125a、miRNA-295、miRNA-181b在小鼠著床前胚胎的表達(dá),探討miRNA在著床前胚胎發(fā)育和細(xì)胞分化中的作用和意義。 方法:采用miRNA特異RT引物進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄,采用SYBR Green實(shí)時(shí)定量PCR技術(shù),研究miR-125a、miR-295和miR-181b在小鼠著床前胚胎發(fā)育過(guò)程中表達(dá)水平的變化。 結(jié)果:著床前胚胎發(fā)育的各階段均表達(dá)miR-125a、miR-295和miR-181b;隨著胚胎的發(fā)育,miR-295的表達(dá)呈逐漸上升的趨勢(shì);miR-125a在卵母細(xì)胞到2細(xì)胞發(fā)育階段呈下降趨勢(shì),以后隨發(fā)育進(jìn)程呈逐漸上升趨勢(shì)。 結(jié)論:miRNA在小鼠著床前胚胎中表達(dá),其可能對(duì)著床前胚胎的發(fā)育和分化過(guò)程起到調(diào)控作用。
【圖文】：

在植物模式中，，miRNA的加工、成熟過(guò)程全部是在細(xì)胞核內(nèi)完成的，這個(gè)過(guò)程沒(méi)有Drosha的參與；在動(dòng)物模式中，miRNA的生物合成過(guò)程相對(duì)植物模式的要復(fù)雜，主要包括下面四個(gè)階段（如圖1）：①基因的轉(zhuǎn)錄；②原始轉(zhuǎn)

和一個(gè) dsRBD 區(qū)域（見(jiàn)圖 2）。Dicer圖2 微小RNA的生物合成相關(guān)基因的結(jié)構(gòu)RNase Ⅲ類核酸酶可以將pre-miRNA切割形成21個(gè)核苷酸的單鏈miRNA，其切割方式為不對(duì)稱切割，這是與小干擾RNA 是不同的。Dicer對(duì)莖環(huán)前體一端5＇磷酸，一端3＇端兩個(gè)懸垂的結(jié)構(gòu)有特殊親和力，在Dicer 進(jìn)一步的作用下，miRNA前體被剪切成20~25個(gè)核苷酸長(zhǎng)度的雙鏈miRNA。多數(shù)miRNA 來(lái)自3′端,少數(shù)來(lái)自 5′端， pre-miR-16-1 、pre-miR-18 已經(jīng)被證實(shí)是由 5′端加工而來(lái)的；pre-miR-19a 、pre-miR-25 由 3′端加工而來(lái)；pre-miR-17 則來(lái)自 5′和 3′端[24]。成熟 miRNA 與其互補(bǔ)序列互相結(jié)合成所謂 miRNA：miRNA* 雙螺旋結(jié)構(gòu)(miRNA* 是miRNA 的互補(bǔ)序列)； 隨后，在解旋酶的作用下，雙螺旋解旋，其中miRNA 鏈結(jié)合到RNA誘導(dǎo)的基因沉默復(fù)合物(RISC)中
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：R321

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本文編號(hào)：2570776