【摘要】： 目的: 白細胞介素-13(Interleukine-13,IL-13)是一個主要由Th2細胞分泌的多效能細胞因子。已證實IL-13是調控肺纖維化的主要Th2細胞因子,IL-13通過與IL-13受體α1(IL-13Rα1)相結合可以產生促纖維化作用。而最近研究發(fā)現(xiàn)IL-13受體α2(IL-13Rα2),可以抑制IL-13信號轉導的功能,上調IL-13Rα2的表達,可以抑制膠原的產生。本實驗檢測肺成纖維細胞(HFL-1)是否表達IL-13Rα2,研究溶血磷脂酸(Lysophosphatidic acid,LPA)是否能上調IL-13Rα2的表達,進而是否能抑制肺成纖維細胞膠原的合成。 方法: 1.臺盼藍染色檢測HFL-1細胞的活性。2.HE染色觀察HFL-1細胞形態(tài)。3.檢測LPA刺激HFL-1細胞對IL-13Rα1、IL-13Rα2mRNA表達的影響:分別以LPA不同濃度、不同時間刺激HFL-1,RT-PCR檢測IL-13Rα1、IL-13Rα2mRNA的表達。4.檢測LPA刺激HFL-1細胞對Ⅰ型膠原(procollagen typeⅠ,PCOLⅠ)mRNA表達的影響:首先LPA以不同時間刺激HFL-1細胞,用RT-PCR檢測PCOLⅠmRNA的表達,再分四組:空白組、LPA組、IL-13組及LPA和IL-13混合組,RT-PCR檢測PCOLImRNA的表達。5.免疫組化檢測Ⅰ型膠原蛋白的表達。 結果: 1. HFL-1細胞活性良好,且LPA對細胞無毒性作用。2. HE染色觀察細胞為長梭形,核為橢圓形。3.RT-PCR檢測結果顯示,LPA刺激HFL-1細胞對IL-13Rα1mRNA的表達沒有影響,但對IL-13Rα2mRNA有影響,隨著LPA刺激時間的延長,IL-13Rα2mRNA的表達逐漸增高,隨著LPA刺激濃度的增高,IL-13Rα2mRNA的表達也逐漸增高,但10μM組與1μM組比較有所降低,但沒有統(tǒng)計學意義。4. RT-PCR檢測結果顯示,LPA刺激HFL-1細胞可以降低PCOLImRNA的表達,并且隨著刺激時間的延長,PCOLImRNA的表達逐漸減低。另外,結果顯示IL-13組與對照組相比,IL-13組PCOLImRNA的表達增高,而LPA和IL-13混合組,PCOLImRNA的表達比LPA組較高,但比IL-13組較低。5.免疫組化結果顯示:與對照組相比,IL-13組Ⅰ型膠原蛋白表達較高,LPA組Ⅰ型膠原蛋白表達較底,而LPA和IL-13混合組,PCOLI蛋白的表達比LPA組較高,但比IL-13組較低。 結論: 1. LPA刺激HFL-1對IL-13Rα1的表達沒有影響,但可以上調IL-13Rα2的表達,并且成時間濃度依賴性。2. LPA刺激HFL-1可以降低PCOLI的表達,并且呈時間依賴性。3. IL-13刺激HFL-1可以上調PCOLI的表達。
【圖文】：

圖 2.HFL-1 細胞 HE 染色圖片(×400)Figure2. Diagram of HFL-1s by HE staining樣品的純度與質量D260nm/OD280nm 值均在 1.8～2.0 之間，表明總 R瓊脂糖凝膠電泳結果：顯示 18S（相當于 1.9kb（mRNA）清晰，且 28：18 為 2：1，，提示 RN28S18S

圖 2.HFL-1 細胞 HE 染色igure2. Diagram of HFL-1s純度與質量/OD280nm 值均在 1.8～2凝膠電泳結果：顯示 18A）清晰，且 28：18 為
【學位授予單位】：南昌大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2009
【分類號】：R329

【參考文獻】

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1 趙洪文;肺成纖維細胞在肺纖維化中的作用[J];國外醫(yī)學.呼吸系統(tǒng)分冊;1996年03期

本文編號：2568986