【摘要】： 血吸蟲病是由血吸蟲感染引起的一種嚴(yán)重危害人類健康的人獸共患寄生蟲病。我國是日本血吸蟲病流行區(qū),該病曾流行于我國長江流域及以南的12個省(市、自治區(qū))。經(jīng)過近60多年的努力,通過查螺滅螺、查病治病,改水改廁及改造環(huán)境等綜合措施,疫情得到了有效的控制。但目前,我國仍有7個省(市、自治區(qū))有血吸蟲病流行。血吸蟲化療是治療血吸蟲病和控制傳播的一項重要的手段。尤其是高效低毒治療藥物吡喹酮的廣泛應(yīng)用,在血吸蟲防治中起到了關(guān)鍵性的作用。但是由于在中、高度流行區(qū)服用吡喹酮面廣量大,隨著同一易感人群反復(fù)服用吡喹酮頻率的增加,以及在實施全民化療中服用吡喹酮劑量不足的幾率相對增多,日本血吸蟲會否對吡喹酮產(chǎn)生抗藥性已引起了人們的廣泛關(guān)注。日本血吸蟲不同地理株對吡喹酮敏感性的調(diào)查及其機(jī)制研究對吡喹酮抗性監(jiān)測及預(yù)防具有重要意義。 本文針對采自中國江蘇、江西、湖南3個地理株血吸蟲成蟲開展了如下研究工作: 1中國大陸日本血吸蟲不同地理株成蟲對吡喹酮敏感性比較 1.1目的:探索日本血吸蟲中國大陸不同地理株成蟲對吡喹酮敏感性是否存在差異。 1.2方法:用3個不同地理株的血吸蟲尾蚴感染小鼠,感染35d后按分組不同分別給予31.25mg/kg×3d、62.5mg/kg×3d、125mg/kg×3d、250mg/kg×3d及500mg/kg×3d劑量吡喹酮給藥。給藥后15d解剖感染小鼠,計算各組減蟲率,并計算不同地理株血吸蟲吡喹酮的ED50值。 1.3結(jié)果:利用graphpad prism 5應(yīng)用軟件擬合出的劑量-反應(yīng)關(guān)系的S形曲線,計算出3個地理株日本血吸蟲吡喹酮半數(shù)有效致死劑量(ED50),江蘇株為68.87mg/kg,95%置信區(qū)間為60.51～78.38mg/kg;江西株為133.3mg/kg, 95%置信區(qū)間為112.5～157.8mg/kg;湖南株為84.18mg/kg, 95%置信區(qū)間為73.98～95.78mg/kg。 1.4結(jié)論:中國大陸日本血吸蟲不同地理株對吡喹酮的敏感性存在明顯差異,其中江西株血吸蟲對吡喹酮的敏感性最低。 2中國大陸日本血吸蟲不同地理株成蟲蛋白質(zhì)組學(xué)差異分析 2.1中國大陸日本血吸蟲不同地理株成蟲可溶性蛋白組分的雙向電泳分析 2.1.1目的:比較中國大陸日本血吸蟲不同地理株間成蟲蛋白質(zhì)組學(xué)差異 2.1.2方法:用3個不同地理株的血吸蟲尾蚴感染家兔,然后收集雌、雄成蟲,分別制備成蟲可溶性蛋白,經(jīng)固相pH梯度雙向凝膠電泳分離。凝膠銀染并用PDQuest 8.0凝膠圖像分析軟件進(jìn)行比較分析,篩選出差異表達(dá)蛋白點。 2.1.3結(jié)果:湖南株、江西株和江蘇株雄蟲分別檢出698±10,650±19,629±23個蛋白點,雌蟲分別檢出670±12,682±22,625±28個蛋白點,其中約90%蛋白點分子量處于20～90KD范圍內(nèi),蛋白等電點分布在5～8之間。不同地理株雌蟲與雄蟲分別進(jìn)行兩兩比較,雄蟲共發(fā)現(xiàn)14個差異點,其中湖南、江蘇株各有一個獨立表達(dá)蛋白點,江西株有1個未表達(dá)點,以江蘇株為基準(zhǔn)另外的 11個蛋白點或表達(dá)上調(diào)或表達(dá)下調(diào);雌蟲發(fā)現(xiàn)18個差異點,其中江蘇株1個獨立表達(dá)點,湖南株1個未表達(dá)點,以江蘇株為基準(zhǔn)另外的16個蛋白點或表達(dá)上調(diào)或表達(dá)下調(diào)。 2.1.4結(jié)論:中國大陸日本血吸蟲不同地理株間成蟲蛋白質(zhì)表達(dá)存在差異。 2.2不同地理株成蟲可溶性蛋白差異點的質(zhì)譜鑒定 2.2.1目的:鑒定差異表達(dá)蛋白與功能分析。 2.2.2方法:切取二維電泳凝膠上的差異表達(dá)蛋白點酶解,采用基質(zhì)輔助激光解析離子化飛行時間質(zhì)譜儀對酶解所得肽段進(jìn)行鑒定,同時結(jié)合生物信息學(xué)對所鑒定的蛋白進(jìn)行功能分析。 2.2.3結(jié)果:選取22個差異表達(dá)蛋白點進(jìn)行質(zhì)譜鑒定分析,對10個蛋白斑點進(jìn)行了肽指紋圖譜的測定,包括7個雄蟲差異表蛋白及3個雌蟲差異表達(dá)蛋白。根據(jù)譜圖的參數(shù),鑒定結(jié)果顯示7個雄蟲差異表達(dá)蛋白點分別為: SJCHGC00821 protein、SJCHGC00475 protein、3-磷酸甘油醛脫氫酶(glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase)、谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶片段(glutathione transferase)、谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶( Glutathione S-Transferase )、D-核酮糖-5-磷酸-3-表異構(gòu)酶(D-ribulose-5-phosphate 3-epimerase)、G蛋白α亞基AgGq1(G protein alpha subunit AgGq1);3個雌蟲表達(dá)蛋白分別為:預(yù)測蛋白(predicted protein)、GAF型傳感器信號轉(zhuǎn)導(dǎo)組氨酸激酶(GAF sensor signal transduction histidine kinase)、組織蛋白酶B樣半胱氨酸蛋白酶前體(Cathepsin B-like cysteine proteinase precursor)。 2.2.4結(jié)論:所鑒定的10個差異蛋白主要與蛋白翻譯后修飾、蛋白代謝、糖代謝、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞調(diào)控及能量代謝等過程相關(guān)。部分蛋白表達(dá)差異與蟲體吡喹酮敏感性密切相關(guān),有待進(jìn)一步深入研究。
【圖文】：

圖 1. 血吸蟲采集地點圖示Fig1. Schistosome collecting site1.2 試劑吐溫 80、羧甲基纖維素 300-800(CMC)、氯化鈉：國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。二甲基亞砜(DMSO)：宜興市第二化學(xué)試劑廠生產(chǎn)。吡喹酮(PZQ)：Sigma 公司產(chǎn)品。1.3 儀器SZ60 解剖鏡： 日本 OLYMPUS 公司產(chǎn)品。37℃孵化溫箱： 德國 MMM 公司產(chǎn)品。

1 各用藥組減蟲率間比較3個地理株的不同用藥組其殘存蟲體數(shù)及其減蟲率如表1，不同用藥組血吸蟲殘存數(shù)量隨著吡喹酮劑量的增加而減少（圖2.A）；減蟲率隨著吡喹酮用藥量的增加而增加，在劑量最高的500mg/kg組，3個地理株日本血吸蟲減蟲率均超過98%，而且3個地理株的趨勢一致（圖2.B）。在31.25mg/kg組，江蘇株、湖南株、江西株減蟲率分別：20.23%、10.96%、0%，江蘇株與湖南株減蟲率之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05)；江蘇株與江西株減蟲率之間差異具有高度統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.01)；江西株與湖南株之間差異具有高度統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.01)。在62.5mg/kg組，江蘇株、湖南株、江西株減蟲率分別：45.07%、43.12%、20.78%，，江蘇株與湖南株減蟲率之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05)；江蘇株與江西株減蟲率之間差異具有高度統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.01)；江西株與湖南株之間差異具有高度統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.01)。在125mg/kg組
【學(xué)位授予單位】：江蘇省血吸蟲病防治研究所
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R383

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 胡奇豐;環(huán)孢素A體內(nèi)抗日本血吸蟲的實驗研究[D];寧波大學(xué);2012年

本文編號：2566179