【摘要】：目的：以3T3-L1脂肪細(xì)胞為模型，觀察萊菔硫烷（sulphoraphane, SFN）對3T3-L1成熟脂肪細(xì)胞線粒體生成、生物活性及產(chǎn)熱能力的影響，以明確SFN對白色脂肪細(xì)胞的轉(zhuǎn)分化誘導(dǎo)作用及分子機(jī)制。 方法：雞尾酒法誘導(dǎo)3T3-L1前脂肪細(xì)胞分化為成熟脂肪細(xì)胞，Mito-Tracker Green染色法檢測3T3-L1前脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化過程中細(xì)胞內(nèi)線粒體含量變化，探索SFN干預(yù)的最佳時(shí)間。小劑量（0-10μmol/L）SFN孵育3T3-L1成熟脂肪細(xì)胞48h，Mito-Tracker Green染色法和Mito Biogenesis In-Cell ELISA Kit試劑盒法檢測SFN處理的脂肪細(xì)胞內(nèi)線粒體數(shù)量，透射電鏡下觀察線粒體超微結(jié)構(gòu)與數(shù)量，試劑盒法分別檢測線粒體復(fù)合物—I(Complex-I)、檸檬酸合酶活性以及ATP的水平，蛋白免疫印跡法檢測SFN干預(yù)48h對線粒體生成與功能相關(guān)蛋白Nrf2、Sirt1、PGC-1α、NRF1、UCP1表達(dá)的影響，綜合評價(jià)SFN處理對3T3-L1成熟脂肪細(xì)胞線粒體生成與活性的影響，探討SFN誘導(dǎo)白色脂肪細(xì)胞向褐色脂肪細(xì)胞轉(zhuǎn)分化誘導(dǎo)作用及分子機(jī)制。 結(jié)果：3T3-L1前脂肪細(xì)胞在誘導(dǎo)分化過程中，線粒體數(shù)量逐漸增加，至第十天趨于穩(wěn)定，故以誘導(dǎo)分化第10天的成熟脂肪細(xì)胞作為本研究對象。Mito-Tracker Green染色顯示，SFN干預(yù)可增加線粒體染色熒光強(qiáng)度。試劑盒法檢測證實(shí)，小劑量SFN干預(yù)可顯著增加3T3-L1成熟脂肪細(xì)胞的線粒體生物合成。透射電鏡可見SFN處理的3T3-L1成熟脂肪細(xì)胞脂滴變小、線粒體數(shù)目增加、在細(xì)胞內(nèi)密集分布、且平均體積增大。SFN處理還可可劑量依賴性地增加細(xì)胞內(nèi)ATP水平。Complex-I和檸檬酸合酶活性檢測提示，SFN干預(yù)明顯增強(qiáng)Complex-I和檸檬酸合酶活性。蛋白免疫印跡檢測顯示，SFN可上調(diào)線粒體生成調(diào)控因子Nrf2、NRF1、Sirt1、PGC-1α蛋白表達(dá)，升高UCP1蛋白水平。 結(jié)論：小劑量（0-10μmol/L）SFN干預(yù)通過激活Sirt1/PGC-1α和Nrf2/PGC-1α兩條通路，增加細(xì)胞內(nèi)線粒體生物合成，增強(qiáng)線粒體活性；并通過升高PGC-1α水平、增強(qiáng)產(chǎn)熱蛋白UCP1表達(dá)，誘導(dǎo)3T3-L1成熟白色脂肪細(xì)胞獲得呼吸和產(chǎn)熱活性。上述結(jié)果表明，小劑量SFN干預(yù)可誘導(dǎo)白色脂肪細(xì)胞向褐色轉(zhuǎn)分化，為以WAT為靶點(diǎn)、探索肥胖防治措施提供科學(xué)依據(jù)。
【圖文】：

萊菔硫烷對脂肪細(xì)胞的轉(zhuǎn)分化誘導(dǎo)作用及分子機(jī)制研究 成熟脂肪細(xì)胞鑒定-油紅 O 染色體脂肪細(xì)胞誘導(dǎo)分化成熟（d10 天）時(shí)，棄含胎牛血清維細(xì)胞 3 次，加適量體積 10%中性福爾馬林，，室溫固定 30mi入油紅 O 染液，室溫避光染色 30min（油紅 O 染色效果受一定要保證溫度）。棄油紅 O 染液，PBS 清洗至洗液無色察、拍照。前體脂肪細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察察時(shí)，3T3-L1前脂肪細(xì)胞平鋪于培養(yǎng)皿底部，呈典型的梭，形態(tài)與成纖維細(xì)胞相似（如圖1.1）。

寧波大學(xué)碩士學(xué)位論文 - 7 -圖1.2 誘導(dǎo)分化過程中3T3-L1前脂肪細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察Fig.1.2 The morphology of differentiating 3T3-L1 preadipocyte.(A-E: day0-10, magnification,×100; F: day10, magnification, ×200.)E: d10 ×100 F: d10 ×200C: d4 ×100 D: d8 ×100A: d0 ×100 B: d2 ×100
【學(xué)位授予單位】：寧波大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R329.2

【參考文獻(xiàn)】

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1 趙文華;翟屹;胡建平;王建生;楊正雄;孔靈芝;陳春明;;中國超重和肥胖造成相關(guān)慢性疾病的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)研究[J];中華流行病學(xué)雜志;2006年07期

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相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 凌宏艷;3T3-L1脂肪細(xì)胞胰島素抵抗相關(guān)miRNAs的篩選及功能研究[D];中南大學(xué);2009年

本文編號：2565675