【摘要】：目的：以3T3-L1脂肪細胞為模型，觀察萊菔硫烷（sulphoraphane, SFN）對3T3-L1成熟脂肪細胞線粒體生成、生物活性及產熱能力的影響，以明確SFN對白色脂肪細胞的轉分化誘導作用及分子機制。 方法：雞尾酒法誘導3T3-L1前脂肪細胞分化為成熟脂肪細胞，Mito-Tracker Green染色法檢測3T3-L1前脂肪細胞誘導分化過程中細胞內線粒體含量變化，探索SFN干預的最佳時間。小劑量（0-10μmol/L）SFN孵育3T3-L1成熟脂肪細胞48h，Mito-Tracker Green染色法和Mito Biogenesis In-Cell ELISA Kit試劑盒法檢測SFN處理的脂肪細胞內線粒體數(shù)量，透射電鏡下觀察線粒體超微結構與數(shù)量，試劑盒法分別檢測線粒體復合物—I(Complex-I)、檸檬酸合酶活性以及ATP的水平，蛋白免疫印跡法檢測SFN干預48h對線粒體生成與功能相關蛋白Nrf2、Sirt1、PGC-1α、NRF1、UCP1表達的影響，綜合評價SFN處理對3T3-L1成熟脂肪細胞線粒體生成與活性的影響，探討SFN誘導白色脂肪細胞向褐色脂肪細胞轉分化誘導作用及分子機制。 結果：3T3-L1前脂肪細胞在誘導分化過程中，線粒體數(shù)量逐漸增加，至第十天趨于穩(wěn)定，故以誘導分化第10天的成熟脂肪細胞作為本研究對象。Mito-Tracker Green染色顯示，SFN干預可增加線粒體染色熒光強度。試劑盒法檢測證實，小劑量SFN干預可顯著增加3T3-L1成熟脂肪細胞的線粒體生物合成。透射電鏡可見SFN處理的3T3-L1成熟脂肪細胞脂滴變小、線粒體數(shù)目增加、在細胞內密集分布、且平均體積增大。SFN處理還可可劑量依賴性地增加細胞內ATP水平。Complex-I和檸檬酸合酶活性檢測提示，SFN干預明顯增強Complex-I和檸檬酸合酶活性。蛋白免疫印跡檢測顯示，SFN可上調線粒體生成調控因子Nrf2、NRF1、Sirt1、PGC-1α蛋白表達，升高UCP1蛋白水平。 結論：小劑量（0-10μmol/L）SFN干預通過激活Sirt1/PGC-1α和Nrf2/PGC-1α兩條通路，增加細胞內線粒體生物合成，增強線粒體活性；并通過升高PGC-1α水平、增強產熱蛋白UCP1表達，誘導3T3-L1成熟白色脂肪細胞獲得呼吸和產熱活性。上述結果表明，小劑量SFN干預可誘導白色脂肪細胞向褐色轉分化，為以WAT為靶點、探索肥胖防治措施提供科學依據(jù)。
【圖文】：

萊菔硫烷對脂肪細胞的轉分化誘導作用及分子機制研究 成熟脂肪細胞鑒定-油紅 O 染色體脂肪細胞誘導分化成熟（d10 天）時，棄含胎牛血清維細胞 3 次，加適量體積 10%中性福爾馬林，，室溫固定 30mi入油紅 O 染液，室溫避光染色 30min（油紅 O 染色效果受一定要保證溫度）。棄油紅 O 染液，PBS 清洗至洗液無色察、拍照。前體脂肪細胞形態(tài)學觀察察時，3T3-L1前脂肪細胞平鋪于培養(yǎng)皿底部，呈典型的梭，形態(tài)與成纖維細胞相似（如圖1.1）。

寧波大學碩士學位論文 - 7 -圖1.2 誘導分化過程中3T3-L1前脂肪細胞形態(tài)學觀察Fig.1.2 The morphology of differentiating 3T3-L1 preadipocyte.(A-E: day0-10, magnification,×100; F: day10, magnification, ×200.)E: d10 ×100 F: d10 ×200C: d4 ×100 D: d8 ×100A: d0 ×100 B: d2 ×100
【學位授予單位】：寧波大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R329.2

【參考文獻】

相關期刊論文 前2條

1 趙文華;翟屹;胡建平;王建生;楊正雄;孔靈芝;陳春明;;中國超重和肥胖造成相關慢性疾病的經濟負擔研究[J];中華流行病學雜志;2006年07期

2 武陽豐,馬冠生,胡永華,李艷平,李賢,崔朝輝,陳春明,孔靈芝;中國居民的超重和肥胖流行現(xiàn)狀[J];中華預防醫(yī)學雜志;2005年05期

相關博士學位論文 前1條

1 凌宏艷;3T3-L1脂肪細胞胰島素抵抗相關miRNAs的篩選及功能研究[D];中南大學;2009年

本文編號：2565675