【摘要】： 目的：探討成人外周血來源的平滑肌祖細(xì)胞(smooth muscle progenitor cells,SPCs)與成熟血管平滑肌細(xì)胞(smooth muscle cells, SMCs)細(xì)胞形態(tài)、增殖潛能等方面的異同點(diǎn),為血管組織工程提供可靠的種子細(xì)胞來源。 方法：1、密度梯度離心法分離成人外周血中單個(gè)核細(xì)胞,于用纖粘連蛋白包被的含血小板衍生生長因子BB (Platelet derived growth factor BB, PDGF-BB)和EGM-2培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中誘導(dǎo)培養(yǎng),觀察細(xì)胞形態(tài)變化,常規(guī)換液、傳代、凍存及復(fù)蘇。 2、通過手術(shù)取得實(shí)驗(yàn)用大隱靜脈3cm,采用膠原蛋白酶消化、差異貼壁法原代培養(yǎng),含PDGF-BB的EGM-2培養(yǎng)基培養(yǎng),觀察細(xì)胞形態(tài),獲得平滑肌細(xì)胞。 3、平滑肌祖細(xì)胞及平滑肌細(xì)胞分別進(jìn)行細(xì)胞爬片,應(yīng)用細(xì)胞免疫熒光檢測平滑肌肌動(dòng)蛋白(a-SMA)和調(diào)寧蛋白(calponinl)的表達(dá)。 4、用RT-PCR檢測平滑肌肌動(dòng)蛋白.(alpha-smooth muscle actin, a-sma)和調(diào)寧蛋白(calponin 1, cap)的mRNA表達(dá)。 5、MTT(四唑鹽比色實(shí)驗(yàn))分別檢測第6代平滑肌祖細(xì)胞與平滑肌細(xì)胞的增殖能力。 結(jié)果：1、SPCs傳代細(xì)胞培養(yǎng)達(dá)80-90%融合時(shí),呈螺旋狀排列,并可呈典型“峰、谷”樣形態(tài),符合平滑肌細(xì)胞形態(tài)學(xué)特征。 2、平滑肌祖細(xì)胞可表達(dá)平滑肌細(xì)胞特異性標(biāo)記α-SMA和calponinl。 3、第6代的SPCs(n=10, A=0.43±0.02)增殖能力明顯強(qiáng)于第6代的SMCs(n=10, A=0.21±0.02, P0.01)。 結(jié)論：1、外周血中單個(gè)核細(xì)胞在PDGF-BB的刺激下可以分化為具有平滑肌細(xì)胞特性的平滑肌祖細(xì)胞。 2、平滑肌祖細(xì)胞較平滑肌細(xì)胞增殖旺盛,培養(yǎng)3個(gè)月未見老化,具有發(fā)展為-種理想的血管組織工程種子細(xì)胞來源的可能性。
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R329

【參考文獻(xiàn)】

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1 李英;段惠軍;;Raf/MEK/ERK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在糖尿病腎病發(fā)生發(fā)展中的作用[J];國際內(nèi)分泌代謝雜志;2007年04期

2 郭澤君;邊云飛;薛君;武衛(wèi)東;肖傳實(shí);;體外培養(yǎng)成人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞及向平滑肌細(xì)胞誘導(dǎo)分化[J];中國動(dòng)脈硬化雜志;2009年03期

3 吳少峰,黃惠民;組織工程血管研究的新進(jìn)展[J];生物醫(yī)學(xué)工程與臨床;2004年01期

4 黃鏗,齊偉力;組織工程化軟骨種子細(xì)胞的研究與展望[J];中國臨床康復(fù);2005年10期

5 唐新華;黃玲;夏寧;彭兆意;熊吉信;;血管組織工程種子細(xì)胞原代培養(yǎng)技術(shù)的改良[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2008年42期

6 王云雅;汪靜;鄧敬蘭;李國權(quán);林國成;顧春虎;;放射性PDGFR-β反義寡核苷酸對(duì)血管平滑肌細(xì)胞增殖和凋亡的影響[J];心臟雜志;2006年04期

7 吳瑩琛;崔磊;曹誼林;;組織工程血管研究進(jìn)展[J];組織工程與重建外科雜志;2006年05期

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本文編號(hào)：2565364