發(fā)布時間：2019-11-24 09:19

【摘要】： 目的：探討成人外周血來源的平滑肌祖細胞(smooth muscle progenitor cells,SPCs)與成熟血管平滑肌細胞(smooth muscle cells, SMCs)細胞形態(tài)、增殖潛能等方面的異同點,為血管組織工程提供可靠的種子細胞來源。 方法：1、密度梯度離心法分離成人外周血中單個核細胞,于用纖粘連蛋白包被的含血小板衍生生長因子BB (Platelet derived growth factor BB, PDGF-BB)和EGM-2培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中誘導培養(yǎng),觀察細胞形態(tài)變化,常規(guī)換液、傳代、凍存及復蘇。 2、通過手術(shù)取得實驗用大隱靜脈3cm,采用膠原蛋白酶消化、差異貼壁法原代培養(yǎng),含PDGF-BB的EGM-2培養(yǎng)基培養(yǎng),觀察細胞形態(tài),獲得平滑肌細胞。 3、平滑肌祖細胞及平滑肌細胞分別進行細胞爬片,應用細胞免疫熒光檢測平滑肌肌動蛋白(a-SMA)和調(diào)寧蛋白(calponinl)的表達。 4、用RT-PCR檢測平滑肌肌動蛋白.(alpha-smooth muscle actin, a-sma)和調(diào)寧蛋白(calponin 1, cap)的mRNA表達。 5、MTT(四唑鹽比色實驗)分別檢測第6代平滑肌祖細胞與平滑肌細胞的增殖能力。 結(jié)果：1、SPCs傳代細胞培養(yǎng)達80-90%融合時,呈螺旋狀排列,并可呈典型“峰、谷”樣形態(tài),符合平滑肌細胞形態(tài)學特征。 2、平滑肌祖細胞可表達平滑肌細胞特異性標記α-SMA和calponinl。 3、第6代的SPCs(n=10, A=0.43±0.02)增殖能力明顯強于第6代的SMCs(n=10, A=0.21±0.02, P0.01)。 結(jié)論：1、外周血中單個核細胞在PDGF-BB的刺激下可以分化為具有平滑肌細胞特性的平滑肌祖細胞。 2、平滑肌祖細胞較平滑肌細胞增殖旺盛,培養(yǎng)3個月未見老化,具有發(fā)展為-種理想的血管組織工程種子細胞來源的可能性。
【學位授予單位】：南昌大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2010
【分類號】：R329

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前7條

1 李英;段惠軍;;Raf/MEK/ERK信號轉(zhuǎn)導通路在糖尿病腎病發(fā)生發(fā)展中的作用[J];國際內(nèi)分泌代謝雜志;2007年04期

2 郭澤君;邊云飛;薛君;武衛(wèi)東;肖傳實;;體外培養(yǎng)成人脂肪間充質(zhì)干細胞及向平滑肌細胞誘導分化[J];中國動脈硬化雜志;2009年03期

3 吳少峰,黃惠民;組織工程血管研究的新進展[J];生物醫(yī)學工程與臨床;2004年01期

4 黃鏗,齊偉力;組織工程化軟骨種子細胞的研究與展望[J];中國臨床康復;2005年10期

5 唐新華;黃玲;夏寧;彭兆意;熊吉信;;血管組織工程種子細胞原代培養(yǎng)技術(shù)的改良[J];中國組織工程研究與臨床康復;2008年42期

6 王云雅;汪靜;鄧敬蘭;李國權(quán);林國成;顧春虎;;放射性PDGFR-β反義寡核苷酸對血管平滑肌細胞增殖和凋亡的影響[J];心臟雜志;2006年04期

7 吳瑩琛;崔磊;曹誼林;;組織工程血管研究進展[J];組織工程與重建外科雜志;2006年05期

，

本文編號：2565364