【摘要】：目的:觀察腸道細(xì)菌代謝產(chǎn)物丁酸對(duì)體外培養(yǎng)小鼠骨髓源樹(shù)突狀細(xì)胞(Bone marrow derived dendritic cells,BMDCs)表型及功能的影響,并探討其可能的機(jī)制。方法:利用丁酸鹽對(duì)GM-CSF和IL-4體外誘導(dǎo)的BMDCs細(xì)胞進(jìn)行處理,采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)BMDCs細(xì)胞表面分子CD80、CD86、MHCⅡ、B7-DC的表達(dá)及其對(duì)T細(xì)胞增殖的影響;用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(RT-PCR)檢測(cè)其細(xì)胞因子IL-6、IL-12的表達(dá);用格里斯反應(yīng)(Griess reaction)和免疫印跡法(Western blot)分別檢測(cè)DC細(xì)胞產(chǎn)生NO2-的生成和Toll樣受體-4(TLR4)信號(hào)通路中ERK分子的磷酸化。結(jié)果:丁酸可下調(diào)LPS誘導(dǎo)的成熟BMDCs細(xì)胞CD80、CD86、MHCⅡ、B7-DC分子的表達(dá)。同時(shí),丁酸也可抑制IL-6和IL-12的分泌,并抑制樹(shù)突狀細(xì)胞對(duì)OVA257-264抗原特異性T細(xì)胞的增殖。進(jìn)一步的Western blot檢測(cè)結(jié)果顯示丁酸可抑制DC細(xì)胞TLR4信號(hào)通路中ERK分子的磷酸化。結(jié)論:丁酸可通過(guò)抑制DC細(xì)胞TLR4信號(hào)通路中ERK分子的磷酸化,下調(diào)DC細(xì)胞的免疫功能。
【圖文】：

跋臁?2.2丁酸對(duì)BMDC細(xì)胞IL-6、IL-12和NO分泌的影響不成熟BMDCs組與LPS刺激成熟BMDCs組比較顯示，成熟BMDCs分泌的細(xì)胞因子IL-6、IL-12(圖2A)和NO(圖2B)明顯增加。但加入丁酸鹽處理后，該BMDCs細(xì)胞對(duì)此類細(xì)胞因子和NO的分泌水平出現(xiàn)明顯下降。此結(jié)果說(shuō)明成熟BMDCs分泌的IL-6、IL-12、NO受到丁酸的抑制。但不成熟BM-DCs組與丁酸鹽/不成熟BMDCs組間結(jié)果比較顯示，BMDCs分泌的IL-6、IL-12、NO并未受到影響，以上結(jié)果說(shuō)明丁酸的處理能夠抑制成熟BMDCs細(xì)胞分泌細(xì)胞因子IL-6、IL-12、NO，而對(duì)不成熟BMDCs細(xì)胞并無(wú)影響。圖1丁酸對(duì)BMDC細(xì)胞膜表面分子的影響Fig．1EffectsofbutyrateonphenotypeofBMDCs2.3丁酸對(duì)BMDCs激活抗原特異性CD8+T細(xì)胞增殖能力的影響B(tài)MDCs細(xì)胞主要的功能之一是激活抗原特異性T細(xì)胞的活化與增殖。為進(jìn)一步研究丁酸對(duì)BMDCs細(xì)胞功能的影響，我們將OVA抗原特異性O(shè)T1CD8+T細(xì)胞進(jìn)行CFSE標(biāo)記后，與OVA荷載的BMDCs進(jìn)行共培養(yǎng)，然后分析7-AAD-CD8+T細(xì)胞的CFSE熒光強(qiáng)度來(lái)反映CD8+T細(xì)胞增殖情況。圖3和表3中的結(jié)果顯示，體外培養(yǎng)的不成熟BMDCs細(xì)胞與LPS刺激成熟BMDCs細(xì)胞均可引起OVA抗原特異性CD8+T的增殖，但成熟BMDCs顯示出較不成熟BMDCs細(xì)胞更強(qiáng)的激活CD8+T細(xì)胞增殖的能力，該組的CD8+T細(xì)胞增殖分裂甚至可達(dá)到第7代，，其第6代的CFSE熒光信號(hào)強(qiáng)度也強(qiáng)于不成熟BMDCs細(xì)胞組。但加入丁酸處理后，成熟BMDCs激活的CD8+T細(xì)胞增殖、分裂出現(xiàn)明顯抑制。BMDC/LPS/BU組的CFSE熒光強(qiáng)度較BMDC/LPS組出現(xiàn)明顯右移。此結(jié)果說(shuō)明丁酸的加入使OVA抗原特異性CD8+T細(xì)胞的增殖受到明顯抑制。而不成熟BMDCs細(xì)胞組與丁酸/不成熟BMDCs細(xì)胞組的結(jié)果顯示，兩組間T細(xì)胞的增殖的CFSE熒光信號(hào)強(qiáng)度最強(qiáng)的都在

-DC熒光信號(hào)強(qiáng)度出現(xiàn)右移，表達(dá)上調(diào);但丁酸處理后可使這些膜表面分子的熒光信號(hào)強(qiáng)度又出現(xiàn)左移，表達(dá)下調(diào)。此結(jié)果說(shuō)明丁酸能夠抑制BMDCs細(xì)胞的成熟。但是，不成熟BMDCs組與丁酸鹽/不成熟DC組間的結(jié)果顯示，丁酸處理后不成熟BMDCs細(xì)胞表面的CD80、CD86、MHCⅡ、B7-DC表達(dá)沒(méi)有明顯改變。此結(jié)果提示丁酸對(duì)于成熟BMDCs細(xì)胞的表型有明顯的抑制效應(yīng)，而對(duì)于不成熟的BMDCs細(xì)胞并無(wú)明顯影響。2.2丁酸對(duì)BMDC細(xì)胞IL-6、IL-12和NO分泌的影響不成熟BMDCs組與LPS刺激成熟BMDCs組比較顯示，成熟BMDCs分泌的細(xì)胞因子IL-6、IL-12(圖2A)和NO(圖2B)明顯增加。但加入丁酸鹽處理后，該BMDCs細(xì)胞對(duì)此類細(xì)胞因子和NO的分泌水平出現(xiàn)明顯下降。此結(jié)果說(shuō)明成熟BMDCs分泌的IL-6、IL-12、NO受到丁酸的抑制。但不成熟BM-DCs組與丁酸鹽/不成熟BMDCs組間結(jié)果比較顯示，BMDCs分泌的IL-6、IL-12、NO并未受到影響，以上結(jié)果說(shuō)明丁酸的處理能夠抑制成熟BMDCs細(xì)胞分泌細(xì)胞因子IL-6、IL-12、NO，而對(duì)不成熟BMDCs細(xì)胞并無(wú)影響。圖1丁酸對(duì)BMDC細(xì)胞膜表面分子的影響Fig．1EffectsofbutyrateonphenotypeofBMDCs2.3丁酸對(duì)BMDCs激活抗原特異性CD8+T細(xì)胞增殖能力的影響B(tài)MDCs細(xì)胞主要的功能之一是激活抗原特異性T細(xì)胞的活化與增殖。為進(jìn)一步研究丁酸對(duì)BMDCs細(xì)胞功能的影響，我們將OVA抗原特異性O(shè)T1CD8+T細(xì)胞進(jìn)行CFSE標(biāo)記后，與OVA荷載的BMDCs進(jìn)行共培養(yǎng)，然后分析7-AAD-CD8+T細(xì)胞的CFSE熒光強(qiáng)度來(lái)反映CD8+T細(xì)胞增殖情況。圖3和表3中的結(jié)果顯示，體外培養(yǎng)的不成熟BMDCs細(xì)胞與LPS刺激成熟BMDCs細(xì)胞均可引起OVA抗原特異性CD8+T的增殖，但成熟BMDCs顯示出較不成熟BMDCs細(xì)胞更強(qiáng)的激活CD8+T細(xì)胞增殖的能力，該組的CD8+T細(xì)胞增殖分裂甚至可達(dá)?

【共引文獻(xiàn)】

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3 李

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