【摘要】： 肝臟作為一個(gè)天然免疫器官,一方面可以識(shí)別病原微生物和毒素,啟動(dòng)免疫應(yīng)答以清除外來有害異物;另一方面,從小腸中吸收來的大量食物性外來的抗原從肝門靜脈進(jìn)入肝臟,常誘導(dǎo)機(jī)體對(duì)此類抗原的耐受,出現(xiàn)“門脈耐受”現(xiàn)象。因此,肝臟局部的免疫狀態(tài)需要非常精細(xì)的調(diào)節(jié),才能保證在特定的情況下正確選擇是啟動(dòng)免疫應(yīng)答還是誘導(dǎo)免疫耐受。目前發(fā)現(xiàn)一種抑制性細(xì)胞亞群——髓系衍生抑制性細(xì)胞(Myeloid-derived suppressor cells,MDSCs)數(shù)量的變化與重癥肝炎發(fā)生發(fā)展具有相關(guān)性:與正常小鼠相比,在重癥肝炎小鼠脾臟、淋巴結(jié)和其它多種外周器官包括肝臟和肺中MDSC的數(shù)目增多。雖然在感染、創(chuàng)傷、腫瘤等的發(fā)生發(fā)展過程中MDSC被證明均參與其中并顯著地抑制機(jī)體的免疫功能,但其在重癥肝炎小鼠中免疫抑制功能未顯示明顯增強(qiáng)。值得注意的是肝臟中包含了眾多的固有性天然免疫細(xì)胞,其中NKT細(xì)胞的比例遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于其他免疫器官。而且相對(duì)于傳統(tǒng)的T細(xì)胞,NKT細(xì)胞能在活化后1-2h內(nèi)迅速的產(chǎn)生Th1型細(xì)胞因子(IFN-γ和IL-2)和Th2型細(xì)胞因子(IL-4和IL-10)。有研究發(fā)現(xiàn)NKT細(xì)胞能通過分泌IL-13來增強(qiáng)MDSC的抑制性活性,同時(shí)又發(fā)現(xiàn)活化的NKT細(xì)胞能促進(jìn)具有免疫抑制性的MDSC分化成為具有免疫活性的APC。本研究通過給小鼠同時(shí)腹腔注射LPS和D-GalN,建立了小鼠重型肝炎模型,從而來探討MDSC在重癥肝炎的發(fā)生發(fā)展中是否參與重癥肝炎的負(fù)向免疫調(diào)控作用,并研究NKT細(xì)胞是否對(duì)MDSC具有調(diào)節(jié)作用及其機(jī)制,以及MDSC對(duì)NKT細(xì)胞調(diào)節(jié)作用。 小鼠在腹腔注射LPS/D-GalN后出現(xiàn)嚴(yán)重的肝臟損傷,血清中的AST和ALT水平的急劇上升,在6.5h時(shí)小鼠開始死亡,7-8h時(shí)大量小鼠死亡,到達(dá)9h時(shí)小鼠的死亡率達(dá)到100%。隨著暴發(fā)性肝炎的進(jìn)行性發(fā)展,MDSC在不同組織,包括了骨髓、脾臟、肝臟和腸系膜淋巴結(jié)中逐漸出現(xiàn)積累。同時(shí)觀察不同亞群MDSC在正�；蚋窝仔∈蠊撬�、脾臟和肝臟中的分布情況,發(fā)現(xiàn)單核系MDSC(Ly6G~-Ly6C~(high))在骨髓、脾臟和肝臟中逐漸積累,而粒系MDSC(Ly6G~+Ly6C~(low))在骨髓中減少,但在脾臟和肝臟中出現(xiàn)了積累。 在脾臟和肝臟中出現(xiàn)了積累在炎癥部位(脾臟、肝臟)中積累的MDSC較骨髓中的MDSC表達(dá)更高水平的炎癥性趨化因子如CCR2,CX_3CR1,CXCR2,CD62L等。而且CXCR2的表達(dá)與粒系細(xì)胞相關(guān),而CCR2和CX_3CR1的表達(dá)與單核系細(xì)胞相關(guān),所以這些趨化因子受體能誘導(dǎo)骨髓來源的MDSC向炎癥部位趨化,并引起不同的MDSC亞群在不同組織器官中的積累。而且,在炎癥部位(脾臟、肝臟)的MDSC較骨髓來源的MDSC表達(dá)更高水平的F4/80,MHCⅡ,CD86,CD40和CD11c,以及更低水平的CD31和抑制性作用酶iNOS和Argl,并且其在抑制T細(xì)胞增殖和誘導(dǎo)Treg細(xì)胞的能力上較骨髓來源的MDSC有所減弱;與此相反的,脾臟和肝臟來源的MDSC產(chǎn)生更高水平的促炎癥細(xì)胞因子(IL-6,TNF-α,IL-12p40和IFN-γ),說明當(dāng)MDSC在向炎癥部位趨化并表現(xiàn)出向成熟髓系細(xì)胞分化趨勢(shì)的同時(shí),其免疫抑制作用降低,并出現(xiàn)促炎效應(yīng)。 值得注意的是,NKT細(xì)胞中細(xì)胞因子的產(chǎn)生與MDSC中STAT1和STAT6的活化相一致。并且相應(yīng)的在6h,MDSC在骨髓中分化程度低并維持較高免疫抑制功能;而與此對(duì)應(yīng)的是炎癥部位MDSC出現(xiàn)向成熟髓系細(xì)胞分化趨勢(shì),并且其免疫抑制能力減弱,并出現(xiàn)促炎效應(yīng)。根據(jù)以上結(jié)果我們推測(cè)炎癥部位中出現(xiàn)的具有成熟分化趨勢(shì)且免疫抑制功能降低的MDSC可能與NKT細(xì)胞的活性相關(guān)。體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)一步表明,在炎癥部位中具有成熟分化趨勢(shì)和促炎功能的MDSC的出現(xiàn)與NKT細(xì)胞的活化相關(guān):與正常來源的NKT細(xì)胞比較,肝炎小鼠骨髓來源的NKT細(xì)胞能誘導(dǎo)MDSC產(chǎn)生大量的Argl和iNOS,并在一定程度上抑制MDSC的分化;而肝炎小鼠脾臟和肝臟來源的NKT與正常來源的NKT細(xì)胞比較,能抑制MDSC中Argl的產(chǎn)生,并誘導(dǎo)MDSC分泌一些炎癥相關(guān)細(xì)胞因子如IL-12p40;而且相對(duì)于無NKT細(xì)胞共培養(yǎng)組,與炎癥部位來源的NKT共培養(yǎng)的MDSC其抑制T細(xì)胞增殖的能力減弱。通過Transwell實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)NKT細(xì)胞促進(jìn)MDSC的分化成熟主要是通過細(xì)胞-細(xì)胞間直接接觸來發(fā)揮作用的。 為了研究炎癥部位(如脾臟和肝臟)積累的出現(xiàn)成熟分化趨勢(shì)和促炎作用的MDSC對(duì)于NKT細(xì)胞的作用,我們檢測(cè)了肝炎小鼠中肝臟和脾臟NKT細(xì)胞的數(shù)量,發(fā)現(xiàn)NKT細(xì)胞比例出現(xiàn)不同程度的下調(diào),且通過線性回歸分析NKT細(xì)胞比例的減少與MDSC的增加具有一定程度的相關(guān)性。并通過體外實(shí)驗(yàn)證明MDSC能活化NKT細(xì)胞,并進(jìn)一步誘導(dǎo)NKT細(xì)胞的凋亡,而且這個(gè)作用是細(xì)胞接觸依賴的,主要通過Fas-FasL途徑實(shí)現(xiàn)。 綜上所述,MDSC在急性重癥肝炎小鼠不同器官中出現(xiàn)積累,其中一些趨化因子受體(如CCR2,CX_3CR1,CXCR2,CD62L)能誘導(dǎo)骨髓來源的MDSC向炎癥部位趨化,并引起不同的MDSC亞群在不同組織器官中的積累。在炎癥部位,活化的NKT細(xì)胞能誘導(dǎo)MDSC出現(xiàn)分化和成熟,從而導(dǎo)致其免疫抑制功能的降低并出現(xiàn)促炎癥的作用,而這些MDSC及其分泌的細(xì)胞因子又能進(jìn)一步活化NKT細(xì)胞,并誘導(dǎo)這些活化的NKT細(xì)胞的凋亡。這些發(fā)現(xiàn)對(duì)于研究天然免疫細(xì)胞如NKT細(xì)胞和調(diào)節(jié)性細(xì)胞如MDSC在肝臟損傷中的作用有一定的提示,對(duì)于控制、治療天然免疫細(xì)胞參與的肝臟疾病具有指導(dǎo)意義。
【圖文】：

oh1.5h3h了ime:afterLps/卜‘a(chǎn)lNco·inj州sonTimesafferLPsl卜。aINeo·inj魷t落on圖5在肝炎小鼠中積累的MDSCs的細(xì)胞因子表達(dá)情況Fig·5.TheeytokineProduetionofMDSCsaeeumulatedinliverinjuryIulee.MDSCswerePurifiedato，1.5，，3and6hafterhePatitisinduced.TheexPressionof

在炎癥部位，NKT細(xì)胞能減弱MDSCs的抑制性功能33
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號(hào)】：R392

【共引文獻(xiàn)】

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1 左衍海;施鑫;;惡性腫瘤轉(zhuǎn)移機(jī)制研究新進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)研究生學(xué)報(bào);2008年03期

2 鄭燕妮;于化鵬;陳新;龔雨新;;LPS誘導(dǎo)CD11b~+Gr-1~+髓源抑制性細(xì)胞在小鼠脾臟募集的研究[J];熱帶醫(yī)學(xué)雜志;2012年02期

3 潘新亭;王新生;王正濱;朱青云;韓燕;;Smad2與TGF-β1基因在胰腺癌中的表達(dá)及臨床意義(英文)[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2012年06期

4 ;Contribution of myeloid-derived suppressor cells to tumor-induced immune suppression,angiogenesis,invasion and metastasis[J];遺傳學(xué)報(bào);2010年07期

5 王一;黎燕;;髓樣來源抑制性細(xì)胞的研究進(jìn)展[J];中國(guó)腫瘤生物治療雜志;2011年04期

6 萬琳;胡鑫;趙賢賢;李曉燕;李卓婭;尹丙姣;;髓樣抑制細(xì)胞免疫抑制機(jī)理的研究[J];中國(guó)免疫學(xué)雜志;2010年01期

7 Olga V Smirnova;Tatiana Yu Ostroukhova;Roman L Bogorad;;JAK-STAT pathway in carcinogenesis:Is it relevant to cholangiocarcinoma progression?[J];World Journal of Gastroenterology;2007年48期

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2 張永亮;Fas信號(hào)促進(jìn)肺癌生長(zhǎng)及其機(jī)制研究[D];浙江大學(xué);2008年

3 馬云龍;胸腺肽α1作用于樹突狀細(xì)胞的抗腫瘤免疫機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2008年

4 李琳;FOXC1抑制乳腺癌轉(zhuǎn)移及p18~（INK4C）參與K562分化的機(jī)制研究[D];東北師范大學(xué);2008年

5 郭俊;Gr-1~+/CD11b~+細(xì)胞通過PD-L1調(diào)節(jié)實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎的研究和EAE對(duì)神經(jīng)發(fā)生影響的初步探討[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2009年

6 王玉;小檗堿對(duì)前列腺癌的抑制作用及其機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2011年

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2 昂冰;OXA/5Fu誘導(dǎo)結(jié)腸癌細(xì)胞釋放DAMPs及在抗腫瘤免疫應(yīng)答中效應(yīng)[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2011年

3 任懂平;骨髓初始髓源抑制細(xì)胞亞群表型鑒定及對(duì)T細(xì)胞免疫抑制功能的研究[D];南華大學(xué);2011年

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5 李廣斌;髓源性抑制細(xì)胞在食管癌患者外周血中的表達(dá)特征及相關(guān)性研究[D];蘇州大學(xué);2011年

6 訾富明;抗原沖擊樹突狀細(xì)胞介導(dǎo)CTL特異性抗白血病作用的體外研究[D];南昌大學(xué);2008年

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8 康波;膠質(zhì)瘤誘導(dǎo)神經(jīng)干細(xì)胞遷移和向神經(jīng)元分化的實(shí)驗(yàn)研究[D];昆明醫(yī)學(xué)院;2010年

9 林浩;TLR4配體脂多糖和紫杉醇對(duì)Lewis肺癌小鼠脾臟來源CD11b~+Gr-1~+MDSCs的作用[D];復(fù)旦大學(xué);2010年

10 張勇;細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞對(duì)惡黑患者髓系來源抑制性細(xì)胞影響的研究[D];河南大學(xué);2012年

本文編號(hào)：2563475