【摘要】： Luman募集因子(Luman-recruiting factor,LRF)是堿性亮氨酸拉鏈蛋白轉錄因子,是Luman活化過程中必需的輔助因子,募集Luman進入特定的亞核區(qū),促進有活性的轉錄復合物的形成。目前,對于LRF的生理功能尚不清楚,獲得其單克隆抗體對于研究LRF的生理功能有非常重要的意義。 本研究測定分析了GST-LRF融合蛋白在E.coli BL21(DE3)中高效表達的條件,以純化的目的蛋白作為抗原,免疫BALB/C小鼠,制備單克隆抗體并進行鑒定。獲得以下結果: 1 GST-LRF融合蛋白(glutathione S-transferase,GST)在E.coli BL21(DE3)中高效表達的條件為:37℃、0.1 mmol/L IPTG、誘導表達5 h。電洗脫法純化得到了高純度的目的蛋白。 2確定了檢測抗GST-LRF融合蛋白抗體的間接ELISA的最佳作用條件:辣根過氧化物酶標記山羊抗小鼠IgG (酶標二抗)的工作濃度為1:1 200;包被抗原為10μg/mL;包被液為pH 9.6,0.05 M碳酸鹽緩沖液;包被條件選擇37℃作用2 h或4℃過夜;封閉液為1.0%明膠,封閉條件為37℃作用1 h。 3用間接ELISA篩選陽性孔,通過有限稀釋法篩選出3株分泌抗GST-LRF單克隆抗體的雜交瘤細胞株:A2E4、B2G6、D2F5。 4采用腹水誘生法制備了A2E4、B2G6、D2F5 3株雜交瘤細胞的單克隆抗體,間接ELISA測定腹水抗體效價均為1:10 000,交叉性試驗表明制備的單抗具有特異性,ELISA測定抗體的相對親和力分別為:0.773μg/mL、0.800μg/mL和0.355μg/mL。
【圖文】：

2.2.2 誘導劑濃度對蛋白表達的影響在不同濃度誘導劑 IPTG 0.1 mmol/L、0.5 mmol/L、1 mmol/L、2 mmol/L、3 mmol/L，，其他條件不變的條件下進行誘導表達，SDS-PAGE 分析（見圖 2-2）；

重組蛋白可溶性分析融合蛋白可溶性分析結果表明，重組質粒轉化菌經裂解處理后，裂解液上清沒有蛋白條帶，而在沉淀中則出現(xiàn)了明顯的蛋白條帶（圖 2-4），提示表達的目的蛋要以包涵體的形式存在于表達產物。
【學位授予單位】：西北農林科技大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2008
【分類號】：R392.6

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本文編號：2559003