【摘要】： 第一部分ERK1/2 MAPK和p38 MAPK通路在iC3b結(jié)合的單核細(xì)胞向樹突狀細(xì)胞分化過程中的作用 目的：研究補(bǔ)體iC3b對人血前體單核細(xì)胞(Mo)分化的影響,進(jìn)一步驗(yàn)證UVB誘導(dǎo)的補(bǔ)體iC3b沉積和CDla+樹突狀細(xì)胞(DC)消失之間的關(guān)系；探討ERK1/2 (ERK44/42) MAPK和p38 MAPK信號(hào)傳導(dǎo)途徑是否參與此影響,相應(yīng)的MAPK抑制劑是否能逆轉(zhuǎn)這種影響；經(jīng)iC3b及ERK1/2特異性抑制劑或p38特異性抑制劑預(yù)處理后的Mo對CD4+T細(xì)胞的作用是否與正常情況下分化的Mo不同。 方法：1)從健康人外周血通過免疫磁珠法分離前體Mo。EAiC3b (IgM-plus iC3b-coated sheep erythrocyte, IgM以及iC3b包被的羊紅細(xì)胞)與人血前體Mo以及IL-4、GM-CSF共同培養(yǎng)2天,并與EA(IgM coated sheep erythrocyte, IgM包被的羊紅細(xì)胞)作對照,用流式細(xì)胞儀檢測EAiC3b對前體Mo分化的影響(CD14+,CDla+); Western blot檢測磷酸化ERK1/2、p38 MAPK的蛋白水平,ELISA法檢測IL-10、IL-12p70水平。2)上述培養(yǎng)過程中加入ERK1/2 MAPK抑制劑(PD98059)、p38 MAPK抑制劑(SB203580)預(yù)處理后,磷酸化ERK1/2、p38 MAPK和IL-10、IL-12p70水平的水平,以及DC數(shù)量的變化。3)CD4+T細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)：Mo經(jīng)PD98059(或SB203580)和EAiC3b預(yù)處理后,與IL-4、GM-CSF共培養(yǎng)6天經(jīng)60Co照射后作為刺激細(xì)胞,同時(shí)分離同種異體人外周血CD4+T作為反應(yīng)細(xì)胞,共培養(yǎng)5天后,經(jīng)3H—摻入法檢測CD4+T細(xì)胞增殖反應(yīng)。 結(jié)果：1)相比EA組結(jié)果,EAiC3b的加入使Mo向CDla+DC方向的分化受到抑制,表現(xiàn)為CDla+的表達(dá)明顯降低,磷酸化—ERK1／2 MAPK的表達(dá)增加,磷酸化—p38 MAPK的表達(dá)降低,IL-12p70的水平降低,IL-10的水平增加,CD4+T細(xì)胞增殖減弱。2)前過程中加入PD98059預(yù)處理后,相比EAiC3b結(jié)果,則促進(jìn)了Mo向CDla+DC方向的分化成熟,表現(xiàn)為CDla+的表達(dá)明顯增加,磷酸化—ERK1／2 MAPK的表達(dá)降低,IL-12p70的水平增高,IL-10的水平降低,CD4+T細(xì)胞增殖明顯提高。3)細(xì)胞經(jīng)SB203580預(yù)處理后,相比EAiC3b結(jié)果,Mo向CDla+DC方向的分化成熟被進(jìn)一步抑制,表現(xiàn)為CDla+的表達(dá)降低,磷酸化—p38 MAPK的表達(dá)降低,IL-12p70的水平稍有降低,IL-10的水平略有增高,CD4+T細(xì)胞增殖有所下調(diào)。 結(jié)論：1)紫外線引起的補(bǔ)體iC3b的沉積是引起CDla+DC消失的重要原因；2) ERK1／2 MAPK抑制劑PD98059可顯著逆轉(zhuǎn)這種現(xiàn)象,促進(jìn)前體Mo向CDla+DC的分化,而p38 MAPK抑制劑SB203580則進(jìn)一步抑制CDla+DC的分化成熟；3)經(jīng)iC3b作用的Mo對CD4+T細(xì)胞的增殖能力明顯減弱,PD預(yù)處理后可顯著恢復(fù),SB預(yù)處理后加強(qiáng)這種抑制。 第二部分：ERK1/2 MAPK抑制劑PD98059可明顯逆轉(zhuǎn)UVB誘導(dǎo)的小鼠皮膚局部免疫抑制,未觀察到SB203580對遲發(fā)性高敏反應(yīng)的抗炎作用 目的：在UVB誘導(dǎo)局部免疫抑制動(dòng)物模型的基礎(chǔ)上,觀察外涂PD9059能否逆轉(zhuǎn)該現(xiàn)象,以證實(shí)ERK1/2 MAPK在免疫抑制中的關(guān)鍵作用,為開發(fā)防光劑提供新的思路；在接觸性高敏反應(yīng)動(dòng)物模型的基礎(chǔ)上,觀察外涂SB203580觀察能否抑制炎癥反應(yīng),為抗炎劑作基礎(chǔ)。 方法：建立UVB誘導(dǎo)局部免疫抑制的小鼠模型,即UVB 8 kJ/m2昭射Balb/c小鼠腹部去毛皮膚后3天,在相同區(qū)域外涂25μ10.5%DNFB致敏,5天后測量基礎(chǔ)右耳廓厚度并在相同耳背處外涂10μ10.2%DNFB激發(fā),24小時(shí)后測量耳廓厚度并取右耳組織做HE病理。PD研究：UVB曝光前1小時(shí)(A組),曝光同時(shí)(A組),曝光后6小時(shí)(C組)外涂PD98059,余步驟同前,檢測耳腫反應(yīng)及HE染色。SB研究：小鼠腹部去毛皮膚外涂不同濃度的SB203580,6小時(shí)后相同皮膚處外涂25μ10.5%DNFB致敏,5天后測量基礎(chǔ)右耳廓厚度并在耳背皮膚外涂10μ10.2%DNFB激發(fā),24小時(shí)后再次測量耳廓厚度并取耳組織做HE病理染色。各組均設(shè)對照。 結(jié)果：PD研究：UVB 8 kJ/m2及其以上劑量可引起局部免疫抑制,在此基礎(chǔ)上,光照后6小時(shí)外涂PD98059組(C組)可部分逆轉(zhuǎn)UVB誘導(dǎo)的局部免疫抑制,表現(xiàn)為和對照組相比,耳腫反應(yīng)有顯著性差異(P0.05),而照光前1小時(shí)(A組)和照光同時(shí)(B組)外涂PD98059組耳腫反應(yīng)無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)；HE染色示真皮水腫增厚伴淋巴細(xì)胞的浸潤。SB研究：和對照組相比,致敏前外涂不同濃度的SB203580對接觸性高敏反應(yīng)無明顯改變(包括耳腫反應(yīng)和病理HE染色)。 結(jié)論：ERK1/2 MAPK通路在UVB誘導(dǎo)的皮膚免疫中起著關(guān)鍵作用,其抑制劑PD98059可顯著逆轉(zhuǎn)UVB誘導(dǎo)的免疫抑制,PD98059或類似物對UVB誘導(dǎo)的免疫抑制有預(yù)防保護(hù)作用；未觀察到SB203580對遲發(fā)性性高敏反應(yīng)的抗炎作用。
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2009
【分類號(hào)】：R392

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 Tyler ZARUBIN;Activation and signaling of the p38 MAP kinase pathway[J];Cell Research;2005年01期

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本文編號(hào)：2557988