【摘要】：目的建立一種簡單、高效、穩(wěn)定的原代神經(jīng)元培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染方法。方法無菌條件下分離生后2 d內(nèi)SD大鼠海馬,經(jīng)消化、反復(fù)沉淀后獲得海馬組織細胞懸液,利用差速貼壁法對神經(jīng)元進行純化,采用神經(jīng)元專用無血清培基進行培養(yǎng),并于倒置顯微鏡下觀察神經(jīng)元形態(tài)的變化,采用微管相關(guān)蛋白(MAP2)抗體對細胞進行鑒定;利用慢病毒轉(zhuǎn)染神經(jīng)元,觀察神經(jīng)元轉(zhuǎn)染效率。結(jié)果體外培養(yǎng)的原代神經(jīng)元,在培養(yǎng)第10~15天可以形成密集的神經(jīng)元網(wǎng)絡(luò),細胞健壯,神經(jīng)元特征明顯;經(jīng)MAP2鑒定,神經(jīng)元純度達95%以上;利用慢病毒轉(zhuǎn)染神經(jīng)元,轉(zhuǎn)染效率達95%以上。結(jié)論采用該方法進行原代神經(jīng)元培養(yǎng),能夠獲得高純度的原代神經(jīng)元;慢病毒是神經(jīng)元轉(zhuǎn)染的理想載體。

【參考文獻】

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本文編號：2555554