【摘要】： 目的: 胃腸道惡性腫瘤是人類最常見的惡性腫瘤。在目前以手術(shù)切除為主的綜合治療中,輔助治療由于其治療模式的非特異性特點(diǎn),常難以達(dá)到理想的效果。樹突細(xì)胞(Dendritic Cell,DC)腫瘤疫苗是近年來興起的一個(gè)免疫治療新方法。CD40配體(CD40ligand,CD40L)在體內(nèi)是T細(xì)胞激活DC功能的重要分子。本實(shí)驗(yàn)旨在通過外源性的CD40L刺激DC,促進(jìn)其分化成熟,增強(qiáng)CEA轉(zhuǎn)基因小鼠的細(xì)胞免疫,探討在CEA轉(zhuǎn)基因小鼠中,CD40L激活的DC誘導(dǎo)細(xì)胞免疫的有效性,為進(jìn)一步進(jìn)行腫瘤疫苗的細(xì)胞毒性試驗(yàn)和動(dòng)物體內(nèi)試驗(yàn)奠定基礎(chǔ)。 材料與方法: 使用CEA轉(zhuǎn)基因小鼠的骨髓細(xì)胞,通過粒-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)和白介素4(IL-4)在體外的刺激,貼壁法定向誘導(dǎo)分化出未成熟DC,利用CD40L刺激未成熟DC后,體外荷載CEA_(526-533)抗原肽,使DC具備誘導(dǎo)特異性細(xì)胞免疫的能力。通過定量測(cè)定DC表面分子、DC分泌的細(xì)胞因子、淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)等來研究此方法激活DC誘導(dǎo)細(xì)胞免疫的有效性。 結(jié)果: 1、實(shí)驗(yàn)組DC表面各類分子的表達(dá)均高于對(duì)照組。 2、實(shí)驗(yàn)組DC分泌的IL-12量顯著高于對(duì)照組(P＜0.01)。 3、實(shí)驗(yàn)組DC刺激的CD8~+T細(xì)胞增殖多于對(duì)照組(P＜0.05),其分泌的INF-γ量顯著高于對(duì)照組(P＜0.01)。 4、實(shí)驗(yàn)組DC刺激的脾細(xì)胞增殖顯著多于對(duì)照組(P＜0.01),其分泌的INF-γ量顯著高于對(duì)照組(P＜0.01)。 結(jié)論: 在CEA轉(zhuǎn)基因小鼠的動(dòng)物模型中,體外使用CD40L刺激骨髓來源DC可以促進(jìn)其分化成熟,該成熟DC能有效增強(qiáng)CEA轉(zhuǎn)基因小鼠的細(xì)胞免疫。
【圖文】：

第一批子代小鼠DNAPCR擴(kuò)增產(chǎn)物

復(fù)I」_人學(xué)碩卜贊位論文圖3第三批子代小鼠 DNAPCR擴(kuò)增產(chǎn)物注:圖1至圖3中M為標(biāo)準(zhǔn)品，1一7泳道分別為一只小鼠的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物。根據(jù)以上PCR結(jié)果，所鑒定的C57BL/6一CEA小鼠組織DNA均可擴(kuò)增出92Obp的條帶。因此實(shí)驗(yàn)所使用的C57BL/6一CEA小鼠均穩(wěn)定攜帶人CEA基因，是本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中理想的動(dòng)物模型。以上顯示三批共21只小鼠的鑒定結(jié)果，本實(shí)驗(yàn)中所使用的小鼠均取自這三批小鼠。二、C57BL/6一CEA小鼠骨髓來源DC免疫表型的鑒定流式細(xì)胞儀對(duì)各組DC表面分子鑒定結(jié)果見圖4:(一)、 NoCD4OL組的DC表面分子表達(dá)分別為 CDlle7.61%， CD401.52%，CDSO138%，， CD8610.81%
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R392

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