【摘要】： 目的：了解上海市醫(yī)院供水系統(tǒng)管道中軍團菌和阿米巴的污染情況,并分析供水系統(tǒng)軍團菌污染的危險因素。方法：2009年5-9月采集上海市8家醫(yī)院供水系統(tǒng)管道末端水樣共193份,分別進行軍團菌和阿米巴的培養(yǎng),并使用軍團菌乳膠凝集試驗將所分離的軍團菌進行血清分型。在采集水樣的同時,檢測水樣的水溫、pH值等指標(biāo)并收集醫(yī)院供水系統(tǒng)相關(guān)資料。結(jié)果：在采樣的8家醫(yī)院中,7家醫(yī)院有軍團菌的定植,占87.5%。5家醫(yī)院的軍團菌定植率超過30%(占總數(shù)的62.5%),2家醫(yī)院嗜肺軍團菌的定植率超過30%(占總數(shù)25.0%)。共檢測水樣193份,軍團菌屬培養(yǎng)陽性的水樣共83份,陽性率為43.0%,其中嗜肺軍團菌陽性的水樣33份,占全部陽性水樣的39.8%。阿米巴培養(yǎng)陽性的水樣共166份,陽性率為86.0%。在軍團菌陽性的83份水樣中,濃度≥103cfu/1的水樣為63份,占陽性總數(shù)的75.9%,濃度≥104 cfu/l的水樣為22份,占陽性總數(shù)的26.5%,其中一份檢測到非1型嗜肺軍團菌的水樣中濃度≥105cfu/1。從重癥監(jiān)護病房(ICU)采集的26份水樣中,11份(42.3%)檢測出軍團菌,6份(23.1%)檢出嗜肺軍團菌,21份(80.8%)檢出阿米巴。ICU中檢測出軍團菌的所有水樣其濃度均≥103cfu/1,7份水樣軍團菌濃度≥104cfu/1。在軍團菌污染危險因素分析中,阿米巴的定植、無水管消毒、水管類型為鍍鋅鋼管及水箱間接供水都是獨立的危險因素。結(jié)論：上海市醫(yī)院供水系統(tǒng)中軍團菌污染常見,且污染濃度高,存在發(fā)生醫(yī)院內(nèi)軍團菌肺炎甚至暴發(fā)流行的嚴(yán)重隱患,建議對醫(yī)院供水系統(tǒng)軍團菌污染情況和醫(yī)院獲得性軍團菌病進行監(jiān)測,并研究具有可行性的供水系統(tǒng)去除軍團菌污染的有效方法。 目的：將上海市5家醫(yī)院供水系統(tǒng)中分離的25株嗜肺軍團菌血清1型(LP1)進行基因分型,了解上海市醫(yī)院環(huán)境內(nèi)LP1的基因多態(tài)性,分析各家醫(yī)院之間LP1基因分型的聯(lián)系和差別,并將3種基因分型方法的結(jié)果進行比較。方法：應(yīng)用脈沖場凝膠電泳(PFGE),基因測序分型(SBT)及重復(fù)序列聚合酶聯(lián)反應(yīng)(Rep-PCR)技術(shù)將5家醫(yī)院分離的共25株LP1進行基因分型。PFGE和Rep-PCR結(jié)果用樹狀聚類圖表示相互聯(lián)系,SBT結(jié)果上傳至網(wǎng)站獲得相應(yīng)的菌株分型號,通過菌株分型號比較相互聯(lián)系。結(jié)果：PFGE分型將24株LP1(1株未分型)分為6型共10個亞型,其中流行株為A、B、E共3型。SBT分型將25株菌株分為7型,其中最多的為ST-1和ST-780。ST-780和ST-784均為中國大陸的特有菌株型。2株LP1的asd序列未能與網(wǎng)站上所有序列匹配而未能獲得ST號。Rep-PCR分型將23株LP1分為A、B、C、D共4個區(qū)域,每個區(qū)中相似度大于98.6%的菌株屬于同一型軍團菌,2株未分型。A區(qū)有11株LP1,分別來自于醫(yī)院1、2、6,以相似度98.6%分為7個不同的類型,而B區(qū)菌株主要來源于醫(yī)院5,結(jié)合相似度和條帶分析共分為4型。3種基因分型均表明在上海市醫(yī)院供水系統(tǒng)內(nèi)存在LP1的主要流行株和散發(fā)株,不同醫(yī)院之間存在相同的基因型,而同一家醫(yī)院內(nèi)存在不同的基因型。3種基因分形方法中SBT和Rep-PCR的耗時最短,操作相對簡單,且SBT分型獲得的結(jié)果穩(wěn)定可靠,不依賴于對圖形的判斷,分型準(zhǔn)確率高,并易于不同實驗室之間的比對,但價格昂貴。PFGE菌株的分辨率較高,SBT中分型一致的菌株在PFGE中還可以分為不同的亞型,但其耗時較長,操作繁瑣,且由于圖像的理解依賴主管判斷,造成各實驗室之間的比對困難。結(jié)論：上海市醫(yī)院供水系統(tǒng)中的LP1存在流行株和散發(fā)株,不同醫(yī)院之間存在相同的基因型,而同一家醫(yī)院內(nèi)存在不同的基因型。在進行流行病學(xué)調(diào)查時不能簡單依靠LP1的血清單克隆抗體分型做出流行病學(xué)關(guān)聯(lián),必須借助于分子生物學(xué)方法進行相關(guān)性分析。SBT分型的準(zhǔn)確率高,有助于各實驗室之間的比對,而PFGE的菌株分辨率較高,但需要進行凝膠圖像的解讀,不利于比對。
【圖文】：

膜在sml的無菌水中用4OKHz超聲洗脫后對照圖。左右側(cè)為過濾采集水樣Gl后的濾膜洗脫液1〔’:;}養(yǎng)使用3塊GVPC平板，分別加入未經(jīng)處理的脫液和經(jīng)熱處理的洗脫液。的濾膜洗脫液0.lml直接接種于GVPC平板。洗脫液在50士1℃的水浴箱中加熱30士Zmin后，板。洗脫液放入無菌試管中，加入等量的酸處理液，05，取0.2ml水樣接種于GVPC平板。

圖4PCR完成后，產(chǎn)物電泳圖物純化和測序增產(chǎn)物純化和測序由invitrogon公司完成。所有PCR產(chǎn)物均析果上傳至數(shù)據(jù)庫~.ewgh.org�？赏瑫r進行質(zhì)控和比對，，果和數(shù)據(jù)庫中目前既有序列匹配，可獲得一個編號。一個菌共獲得7個編號，7個編號按照既定順序(flaA一Pi1E--asd一neuA)排列可獲得一個菌株分型號�；虻臏y序結(jié)果和數(shù)據(jù)庫中目前既有序列不匹配，則其編號編號按照順序排列后未能匹配目前數(shù)據(jù)庫中的編號排列，則異性菌株，可將其上傳數(shù)據(jù)庫獲得新的序列分型號。
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R378

【參考文獻】

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1 龔瑾;胡必杰;謝紅梅;張文平;靳大衛(wèi);張萍海;;醫(yī)院供水系統(tǒng)中軍團菌污染狀況調(diào)查[J];中國感染與化療雜志;2008年05期

本文編號：2552716