發(fā)布時(shí)間：2019-10-24 07:32

【摘要】：目的建立佐劑型關(guān)節(jié)炎大鼠滑膜成纖維細(xì)胞(AAFLS)原代培養(yǎng)方法及其特性分析,探討AA-FLS作為RA體外研究細(xì)胞模型的可行性。方法采用熱殺死結(jié)核分枝桿菌H37Ra(Mtb)免疫SD大鼠,建立佐劑型關(guān)節(jié)炎大鼠模型,取大鼠雙側(cè)膝關(guān)節(jié)滑膜組織進(jìn)行原代細(xì)胞培養(yǎng),顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài);免疫細(xì)胞化學(xué)方法鑒定細(xì)胞;CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖活性;ELISA方法測(cè)定細(xì)胞上清中TNF-α和IL-1β水平;Hochest 33258法檢測(cè)細(xì)胞凋亡狀態(tài);Western bolt方法檢測(cè)AA FLS細(xì)胞線粒體凋亡通路重要調(diào)控蛋白Bcl-2和Bax及Pro-caspase-3和Cleave-caspase-3水平的表達(dá)。結(jié)果膠原酶法分離獲得的滑膜成纖維細(xì)胞經(jīng)傳代純化,呈梭形的細(xì)胞占0.95以上,免疫細(xì)胞化學(xué)鑒定顯示滑膜成纖維細(xì)胞vimentin表達(dá)呈陽(yáng)性,CD68表達(dá)為陰性;AA模型大鼠滑膜成纖維細(xì)胞增殖活性較正常大鼠滑膜成纖維細(xì)胞增殖活性明顯提高,細(xì)胞凋亡率降低;在培養(yǎng)的細(xì)胞上清中TNF-α和IL-1β水平明顯升高;線粒體凋亡通路調(diào)控蛋白Bcl-2水平明顯升高,而B(niǎo)ax蛋白表達(dá)水平明顯降低,同時(shí)AA-FLS細(xì)胞中pro-caspase-3表達(dá)量增加。結(jié)論 AA-FLS具有增殖活躍、凋亡抑制和分泌高水平促炎性細(xì)胞因子的生物特性,可作為體外篩選抗RA藥物的細(xì)胞模型。
【作者單位】： 南方醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)藥學(xué)院;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No 31240045)
【分類號(hào)】：R-332;R259

【共引文獻(xiàn)】

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7 陳建雙;于海榮;張玉玲;佟繼銘;;赤雹根總皂苷對(duì)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎大鼠血清細(xì)胞因子的影響[J];時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥;2012年05期

8 袁立霞;;當(dāng)歸拈痛湯及其拆方對(duì)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎大鼠滑膜組織MMP-3調(diào)節(jié)作用的實(shí)驗(yàn)研究[J];時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥;2013年06期

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5 梅湘;青藤堿對(duì)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎模型大鼠甘露糖受體表達(dá)及相關(guān)抗體影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];成都中醫(yī)藥大學(xué);2014年

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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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【相似文獻(xiàn)】

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8 柏干蘋(píng);周麗娜;賀偉峰;羅高興;陳烯偉;陳光興;胡曉紅;石東文;方勇飛;吳軍;;S100A4,A10在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維細(xì)胞中的表達(dá)及意義[J];第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2008年07期

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10 姜林娣;王漢洲;郭津生;趙鳳娣;薛如意;王吉耀;;RNA干擾技術(shù)抑制類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎成纖維細(xì)胞COX-2合成[J];復(fù)旦學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2007年02期

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8 李茹;張曉蘋(píng);王世瑤;穆榮;栗占國(guó);;miR-146a對(duì)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者滑膜成纖維細(xì)胞的抑制作用研究[A];全國(guó)臨床免疫檢驗(yàn)研討會(huì)暨第六屆全國(guó)臨床免疫學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2009年

9 趙文君;崔爽爽;邢國(guó)勝;于順祿;;類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維細(xì)胞對(duì)T淋巴細(xì)胞生物學(xué)行為的干預(yù)作用[A];第十九屆全國(guó)中西醫(yī)結(jié)合骨傷科學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2012年

10 鄭一寧;梅軼芳;李宏穎;魏雪敏;韓玉艷;于惠銘;張志毅;;三氧化二砷調(diào)控類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維細(xì)胞促血管生成作用的分子機(jī)制[A];第17次全國(guó)風(fēng)濕病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2012年

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5 柏干蘋(píng);正常人與關(guān)節(jié)炎患者血漿、滑膜細(xì)胞的差異蛋白質(zhì)組分析[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2006年

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5 賀t$雯;HMGB1與LPS協(xié)同激活類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎滑膜成纖維細(xì)胞產(chǎn)生基質(zhì)金屬蛋白酶的分子機(jī)制[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2011年

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本文編號(hào)：2552448