發(fā)布時間：2019-10-18 09:45

【摘要】： 旋毛蟲病是由旋毛蟲(Trichinella spiralis)引起的一種呈全球性分布的人獸共患寄生蟲病,可感染人及150多種動物,在我國該病仍有發(fā)生,不僅給畜牧業(yè)生產(chǎn)和肉品工業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失,而且嚴(yán)重威脅著人民群眾的身體健康。旋毛蟲病的臨床表現(xiàn)癥狀一般不具典型特征,臨床診斷較為困難,易與其他傳染病相混淆。雖然肌肉活檢發(fā)現(xiàn)幼蟲或包囊雖可確診,但在輕度感染早期往往不易檢出,即使是感染晚期,因組織局限性的影響,活檢陽性率也只有50%左右,且不易被人們接受。為此,尋找一種特異性強(qiáng)、敏感性高的診斷方法對旋毛蟲病的防治具有重要意義。免疫學(xué)方法ELISA是目前最為敏感的方法,其敏感性可檢測至每克肉0.01條蟲體即每公斤肉含蟲量少于10條,這一敏感性可完全確保肉類的安全,然而實驗表明,用旋毛蟲肌幼蟲ES抗原為診斷抗原檢測血清中抗旋毛蟲抗體在感染2周后才可檢出,而循環(huán)抗原(CAg)即排泄分泌(ES)抗原在最初幾天就可檢測到。因此,檢測CAg是解決旋毛蟲病早期診斷一個很有效的方法。為實現(xiàn)旋毛蟲病的早期診斷,我們選用旋毛蟲新生幼蟲ES抗原作為篩選抗原,通過反復(fù)攻蟲的免疫方法和單克隆抗體的制備技術(shù)獲得了三株抗旋毛蟲新生幼蟲ES的單克隆抗體。通過免疫熒光實驗我們發(fā)現(xiàn)這三株單克隆抗體可以與新生幼蟲裸蟲及感染早期的旋毛蟲發(fā)生反應(yīng)。證明我們所制備的單克隆抗體可以用于旋毛蟲病的早期診斷。此外,我們還用所制備的單克隆抗體建立了旋毛蟲病早期診斷雙抗體夾心ELISA方法,為建立檢測旋毛蟲CAg早期診斷旋毛蟲病的診斷試劑盒和試紙條奠定了基礎(chǔ)。
【圖文】：

體的雜交瘤細(xì)胞3株，分別命名為TS-C6G7、TS-H6C3和TS-C4F3。每株細(xì)胞的每代克隆均凍存2~4支，其它細(xì)胞株在克隆過程中因抗體分泌能力減弱或喪失而棄去，克隆結(jié)果見表2.4，部分克隆細(xì)胞見圖2.1：表 2.4 雜交瘤細(xì)胞克隆結(jié)果Tab.2.4 Results of hybridoma cells cloning雜交瘤細(xì)胞克隆過程細(xì)胞培養(yǎng)上清抗體檢測結(jié)果見表 2.5，隨著克隆代數(shù)的增加，細(xì)胞培養(yǎng)上清抗體的 OD490值逐步升高。雜交瘤細(xì)胞株及克隆結(jié)果克隆次數(shù)TS-C6G7 TS-H6C3 TS-C4F3單克隆率 陽性率 單克隆率 陽性率 單克隆率 陽性率第 1 次克隆50%(48/96)62.5%(30/48)44.8%(43/96)46.5%(20/43)52.1%(50/96)50%(25/50)第 2 次克隆36.5%(35/96)80%(28/35)34.3%(33/96)66.7%(22/33)38.5%(37/96)51.3%(19/37)第 3 次克隆53.1%(51/96)100%(51/51)63.5%(61/96)100%(61/61)56.2%(54/96)100%(54/54)

圖 2.2 雜交瘤細(xì)胞染色體核型鑒定(1000×)Fig 2.2 Chromosomes configuration of hybridoma cellsA: TS-C6G7 (107 條); B:TS-H6C3 (97 條); C: TS-C4F3 (103 條)2.2.4.2 單抗亞類鑒定結(jié)果2.2.4.2.1 ELISA 鑒定結(jié)果用 Sigma 公司的單抗亞類鑒定試劑盒對 TS-C6G7、TS-H6C3、TS-C4F3 三株單抗進(jìn)行亞類鑒定，，結(jié)果見表 2.7。TS-C6G7為IgG2b，TS-H6C3為 IgG2a；TS-C4F3為 IgG1 類。表 2.7 單克隆抗體亞類鑒定（ELISA）Tab. 2.7 Subtype of monoclonal antibodies單克隆抗單 克 隆 抗 體 亞 類體類型 IgG1 IgG2a IgG2b IgG3 IgM IgATS-C6G7 1.028 1.447 2.382 1.113 0.981 0.887TS-H6C3 1.006 1.559 0.827 0.834 0.601 1.102
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號】：R392

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9 劉明遠(yuǎn);盧強(qiáng);付寶權(quán);吳秀萍;J.F.Fabien;C.Trap;張西臣;P.Boireau;;中國旋毛蟲種類鑒定、基因變異性分析及其新生幼蟲期特異性基因的分離與鑒定[A];新世紀(jì) 新機(jī)遇 新挑戰(zhàn)——知識創(chuàng)新和高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)發(fā)展（下冊）[C];2001年

10 劉明遠(yuǎn);;我國的旋毛蟲病及中歐合作研究進(jìn)展[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會2006學(xué)術(shù)年會論文集（上冊）[C];2006年

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8 原麗紅;旋毛蟲新生幼蟲編碼p46 kDa抗原基因的克隆、表達(dá)及抗原性分析[D];吉林大學(xué);2005年

9 楊志東;旋毛蟲、偽旋毛蟲肌幼蟲cDNA文庫的構(gòu)建及其免疫學(xué)篩選[D];吉林大學(xué);2007年

10 杜婧;旋毛蟲腸期抗原基因的沙門氏菌運載體研究[D];吉林大學(xué);2012年

本文編號：2551027