【摘要】： 前言 人們觀察應(yīng)激對(duì)機(jī)體免疫功能影響時(shí)發(fā)現(xiàn),應(yīng)激會(huì)導(dǎo)致免疫功能低下,其中,自然殺傷細(xì)胞(NK細(xì)胞)殺傷活性也受到抑制。研究表明,慢性應(yīng)激可顯著降低鼠脾NK細(xì)胞的殺傷活性并減少脾NK細(xì)胞的數(shù)量,而外科手術(shù)應(yīng)激可下調(diào)癌癥病人NK細(xì)胞數(shù)量和活性。NK細(xì)胞是天然免疫的主要細(xì)胞,NK細(xì)胞殺傷活性及免疫調(diào)節(jié)功能的紊亂可能導(dǎo)致自身免疫疾病和惡性腫瘤的發(fā)生。 應(yīng)激導(dǎo)致免疫功能改變的主要介導(dǎo)通路為下丘腦—垂體—腎上腺皮質(zhì)軸(HPA軸)和交感神經(jīng)系統(tǒng)(SNS)。HPA軸激活后從腎上腺皮質(zhì)釋放的糖皮質(zhì)激素(GC)是免疫抑制作用的重要調(diào)節(jié)遞質(zhì)。人體皮質(zhì)激素的分泌具有晝夜節(jié)律性,生理濃度約為3.9～16.3μg/dl,應(yīng)激情況下,人體內(nèi)可的松水平可高達(dá)30～80μg/dl并伴有免疫抑制,提示,應(yīng)激時(shí)出現(xiàn)的免疫抑制與體內(nèi)糖皮質(zhì)激素水平有關(guān)。 GC可致數(shù)種正常組織細(xì)胞和腫瘤淋巴樣細(xì)胞死亡。但GC是否能誘導(dǎo)人NK細(xì)胞凋亡尚無(wú)定論。本實(shí)驗(yàn)研究了氫化可的松(hydrocortisone,HC)體外對(duì)NK-92MI細(xì)胞株殺傷活性及凋亡的影響,為深入研究應(yīng)激與免疫抑制之間的關(guān)系奠定基礎(chǔ)。 方法 用不同濃度的氫化可的松處NNK-92MI細(xì)胞;采用MTT比色法測(cè)定NK-92MI細(xì)胞的增殖率和對(duì)靶細(xì)胞的殺傷作用;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)NK-92MI細(xì)胞凋亡率;RT-PCR檢測(cè)凋亡相關(guān)基因Bcl-2、Bax的表達(dá)。 結(jié)果 作用NK-92MI細(xì)胞24、48、72小時(shí)后,7.5μg/dl和15μg/dl的HC對(duì)其增殖無(wú)明顯抑制作用(P＞0.05),30μg/dl、60μg/dl、120μg/dl、240μg/dl的HC對(duì)其增殖均有明顯抑制作用(P＜0.05),且呈濃度時(shí)間依賴性;效靶比為5:1時(shí),7.5μg/dl和15μg/dl的HC對(duì)NK-92MI細(xì)胞殺傷活性無(wú)顯著影響(P＞0.05),30μg/dl、60μg/dl、120μg/dl、240μg/dl的HC對(duì)其殺傷活性抑制作用顯著(P＜0.05),呈濃度依賴性;60μg/dl、240μg/dl的HC可誘導(dǎo)NK-92MI細(xì)胞發(fā)生凋亡;與對(duì)照組相比,60μg/dlHC24h組Bcl-2基因表達(dá)降低(P＜0.05),Bax基因表達(dá)增高(P＜0.01)。 討論 NK-92細(xì)胞作為一種自然殺傷細(xì)胞系,具有與人外周血NK細(xì)胞相似的表面分子特征和功能特點(diǎn),NK-92MI細(xì)胞是NK-92細(xì)胞轉(zhuǎn)染IL-2cDNA后非IL-2依賴型細(xì)胞株。本實(shí)驗(yàn)證明,應(yīng)激濃度的HC體外可以抑制NK-92MI細(xì)胞增殖、降低其殺傷活性并誘導(dǎo)其凋亡。這一結(jié)果為神經(jīng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)與免疫系統(tǒng)之間密切的功能聯(lián)系提供了依據(jù),提示:應(yīng)激時(shí)HPA軸激活后,刺激腎上腺皮質(zhì)大量釋放的糖皮質(zhì)激素抑制了NK細(xì)胞的增殖和殺傷活性并誘導(dǎo)其凋亡,這很可能就是應(yīng)激時(shí)NK細(xì)胞功能抑制及循環(huán)數(shù)量減少的原因之一。然而,體內(nèi)糖皮質(zhì)激素濃度是處于動(dòng)態(tài)變化之中,且應(yīng)激時(shí)各種內(nèi)環(huán)境因素相互影響,體外實(shí)驗(yàn)不可能完全反映體內(nèi)應(yīng)激狀態(tài),因此,仍需結(jié)合體內(nèi)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步確定應(yīng)激時(shí)免疫功能尤其是NK細(xì)胞功能抑制的具體原因。凋亡是多基因嚴(yán)格控制的過(guò)程。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)HC處理組促凋亡的Bax基因的轉(zhuǎn)錄水平高于對(duì)照組,Bcl-2基因轉(zhuǎn)錄水平下降,證實(shí)HC誘導(dǎo)的NK-92MI細(xì)胞凋亡與Bax/Bcl-2升高有關(guān)。 結(jié)論 1、應(yīng)激濃度(30μg/dl、60μg/dl、120μg/dl、240μg/dl)的HC可以抑制NK-92MI細(xì)胞生長(zhǎng)和增殖且呈濃度時(shí)間依賴性; 2、應(yīng)激濃度的HC降低NK-92MI細(xì)胞殺傷活性,呈濃度依賴性; 3、60μg/dl、240μg/dl的HC可以誘導(dǎo)NK-92MI細(xì)胞凋亡; 4、HC誘導(dǎo)的NK-92MI細(xì)胞的凋亡與細(xì)胞內(nèi)Bax/Bcl-2基因表達(dá)增高有關(guān)。
【圖文】：

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