發(fā)布時(shí)間：2019-10-10 13:55

【摘要】： 甲肝病毒(Hepatitis A virus,HAV)和戊肝病毒是腸道傳播的肝炎病毒。兩種都是無(wú)包膜的正鏈小RNA病毒。HAV主要感染兒童,但隨著年齡增加,一旦感染,肝炎癥狀會(huì)更嚴(yán)重。戊肝暴發(fā)主要發(fā)生在許多發(fā)展中國(guó)家,導(dǎo)致數(shù)萬(wàn)人感染。在孕婦患者中,戊肝致死率較高,可達(dá)20%。此外,HAV和HEV從流行病學(xué)到臨床癥狀都很相似,主要依靠實(shí)驗(yàn)室檢查進(jìn)行鑒別。已有文獻(xiàn)報(bào)道因飲用了被HAV和HEV污染的水而同時(shí)感染甲肝和戊肝的病例。 本論文主要研究了HAV vp1和HEV ORF2編碼的抗原片斷形成嵌合類(lèi)病毒顆粒的免疫原性。將HAV vp1(aa24～171)與HEV ORF2(aa431～615)N端相連,形成重組抗原AEAg342或與ORF2 C端相連,形成EAAg342重組抗原。將上訴兩種嵌合抗原基因插入表達(dá)載體pBV220,在大腸桿菌BL21中獲得了高效表達(dá)。但只有重組蛋白EAAg342能形成直徑10～20 nm的VLP顆粒。SDS-PAGE顯示該抗原能形成部分二聚體結(jié)果,Western blot顯示該二聚體能與人抗HAV和HEV陽(yáng)性血清反應(yīng)。 本研究評(píng)價(jià)了重組蛋白AEAg342和EAAg342誘導(dǎo)的特異體液免疫反應(yīng)。兩組昆明鼠,每組5只,分別注射一種重組抗原10μg+弗氏佐劑,3周后再注射一次,同時(shí)設(shè)一組空白對(duì)照組。于第一次免疫后2,4,6,8和10周采血測(cè)特異性抗HAV和HEV IGg滴度。結(jié)果顯示EAAg342誘導(dǎo)的抗體滴度在第8周達(dá)到了1:80 000,顯著高于AEAg342組。同時(shí),EAAg342組的抗HAV抗體滴度達(dá)到了1:7 000,也高于AEAg342組。 本研究的結(jié)果說(shuō)明了嵌合VLP EAAg342可以誘導(dǎo)良好的抗HAV和HEV免疫反應(yīng)。此外,嵌入的HAV VP1片斷可以增強(qiáng)VLP的免疫原性,同時(shí)VLP也賦予了HAV vp1良好免疫原性。
【圖文】：

pBv220圖譜

EcoR璐ail雙酶切， T4DNA連接酶連接于經(jīng)上述雙酶切的pBv220載體，轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5a。抽提質(zhì)粒，經(jīng)上述雙酶切鑒定重組子，陽(yáng)性重組子送上海生工公司測(cè)序�！亟M表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建見(jiàn)圖2。⑧…、0 FigZConstruetionofreeombinantPla￡rnid圖2重組質(zhì)粒構(gòu)建
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類(lèi)號(hào)】：R392

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本文編號(hào)：2547208