【摘要】： 甲肝病毒(Hepatitis A virus,HAV)和戊肝病毒是腸道傳播的肝炎病毒。兩種都是無包膜的正鏈小RNA病毒。HAV主要感染兒童,但隨著年齡增加,一旦感染,肝炎癥狀會更嚴重。戊肝暴發(fā)主要發(fā)生在許多發(fā)展中國家,導致數萬人感染。在孕婦患者中,戊肝致死率較高,可達20%。此外,HAV和HEV從流行病學到臨床癥狀都很相似,主要依靠實驗室檢查進行鑒別。已有文獻報道因飲用了被HAV和HEV污染的水而同時感染甲肝和戊肝的病例。 本論文主要研究了HAV vp1和HEV ORF2編碼的抗原片斷形成嵌合類病毒顆粒的免疫原性。將HAV vp1(aa24～171)與HEV ORF2(aa431～615)N端相連,形成重組抗原AEAg342或與ORF2 C端相連,形成EAAg342重組抗原。將上訴兩種嵌合抗原基因插入表達載體pBV220,在大腸桿菌BL21中獲得了高效表達。但只有重組蛋白EAAg342能形成直徑10～20 nm的VLP顆粒。SDS-PAGE顯示該抗原能形成部分二聚體結果,Western blot顯示該二聚體能與人抗HAV和HEV陽性血清反應。 本研究評價了重組蛋白AEAg342和EAAg342誘導的特異體液免疫反應。兩組昆明鼠,每組5只,分別注射一種重組抗原10μg+弗氏佐劑,3周后再注射一次,同時設一組空白對照組。于第一次免疫后2,4,6,8和10周采血測特異性抗HAV和HEV IGg滴度。結果顯示EAAg342誘導的抗體滴度在第8周達到了1:80 000,顯著高于AEAg342組。同時,EAAg342組的抗HAV抗體滴度達到了1:7 000,也高于AEAg342組。 本研究的結果說明了嵌合VLP EAAg342可以誘導良好的抗HAV和HEV免疫反應。此外,嵌入的HAV VP1片斷可以增強VLP的免疫原性,同時VLP也賦予了HAV vp1良好免疫原性。
【圖文】：

pBv220圖譜

EcoR璐ail雙酶切， T4DNA連接酶連接于經上述雙酶切的pBv220載體，轉化大腸桿菌DH5a。抽提質粒，經上述雙酶切鑒定重組子，陽性重組子送上海生工公司測序。‘重組表達質粒構建見圖2。⑧…、0 FigZConstruetionofreeombinantPla￡rnid圖2重組質粒構建
【學位授予單位】：中國協和醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2008
【分類號】：R392

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本文編號：2547208