【摘要】： 目的探討在體外誘導(dǎo)兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向平滑肌細(xì)胞分化的的有效方法,以便為后續(xù)實(shí)驗(yàn)工作提供穩(wěn)定的種子細(xì)胞來源。 方法以密度梯度離心法自兔骨髓液獲取骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞進(jìn)行原代及傳代培養(yǎng),觀察其形態(tài)學(xué)變化并鑒定。以5-氮雜胞苷、平滑肌細(xì)胞培養(yǎng)上清液誘導(dǎo)及與平滑肌細(xì)胞共培養(yǎng)誘導(dǎo)等方法誘導(dǎo)其向平滑肌細(xì)胞分化,通過形態(tài)學(xué)觀察及免疫組化方法比較各種誘導(dǎo)方法的誘導(dǎo)效率。 結(jié)果原代培養(yǎng)的兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞形態(tài)較為均一,呈成纖維細(xì)胞樣,生長增殖迅速,傳代培養(yǎng)生長良好。培養(yǎng)的細(xì)胞經(jīng)流式細(xì)胞儀鑒定,CD34及CD45表達(dá)很弱、而CD90強(qiáng)表達(dá),證明所培養(yǎng)的細(xì)胞為較純的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。在各組誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)中,以5-氮雜胞苷誘導(dǎo)及共培養(yǎng)誘導(dǎo)聯(lián)合處理組誘導(dǎo)組效率最高,單純共培養(yǎng)誘導(dǎo)組與5-氮雜胞苷誘導(dǎo)及上清液誘導(dǎo)聯(lián)合處理組次之,二組誘導(dǎo)率無顯著差異,單純以上清液誘導(dǎo)組效率最低。 結(jié)論密度梯度離心結(jié)合貼壁篩選能獲得較純的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。5-氮雜胞苷及共培養(yǎng)誘導(dǎo)聯(lián)合處理能有效地誘導(dǎo)其向平滑肌細(xì)胞分化。
【圖文】：

操作輕柔，，避免沖散分離液面，或與分離液混合而影心 30min,離心后管內(nèi)液體分為三層，上層為血漿層，離液層，底層為紅細(xì)胞和多核白細(xì)胞層，在上層與中見呈白色的薄霧狀的單個核細(xì)胞層（圖 2.1）。以毛細(xì)周緣吸盡該層面的單個核細(xì)胞，可多吸些血漿層，但移入另一離心管骨，再加入 4 倍于其體積的 PBS 與之 10 min,吸去上清液，保留離心管底部約 1ml 液體，重含 10%胎牛血清的 DMEM-LG 培養(yǎng)基（添加青霉素ml）重懸細(xì)胞沉淀，充分混勻后，以血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)4/ml 接種于 25cm2培養(yǎng)瓶中，靜置于 37℃、5%CO2培

1兔BMMSCs生長曲線
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號】：R329

【引證文獻(xiàn)】

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1 李亞楠;陰道上皮細(xì)胞體外誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向上皮細(xì)胞分化的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2013年

本文編號：2542103