【摘要】： 目的剛地弓形蟲是人和動物感染率極高的一種機會致病原蟲,其中速殖子階段是主要的致病階段。速殖子的大規(guī)模全蛋白質組學分析仍然還在進行,但目前尚無弓形蟲的完全蛋白質組圖。所以本研究應用蛋白質組學技術分析剛地弓形蟲可溶性速殖子抗原(soluble tachyzoite antigen,STAg)組分,尋找具有免疫原性的抗原,為弓形蟲疫苗有效候選抗原研究提供理論和實驗依據(jù)。 方法常規(guī)復蘇弓形蟲速殖子,腹腔接種BALB/c小鼠,轉種3次恢復其活力,收集腹腔沖洗液,純化,離心,上清液即為STAg,用三氯醋酸丙酮沉淀法制備2-DE樣品。STAg樣品,通過等電聚焦和SDS-PAGE電泳技術分離獲得弓形蟲STAg組分全蛋白點,用兔抗弓形蟲血清和兔純血清(陰性對照)做免疫印跡獲得免疫原性的蛋白點。切取這些點、進行膠內(nèi)酶解,ABI4700質譜儀對蛋白點進行鑒定分析。 結果2-DE凝膠圖顯示1227個蛋白斑點,經(jīng)質譜對其鑒定,得到230個弓形蟲蛋白點,Western blot檢測顯示,16個蛋白點具有免疫原性。這些蛋白點中,主要表面抗原1(SAG1, 4個斑點)曾有報道具有免疫原性,熱休克蛋白70(Hsp70)的免疫原性尚存在爭議,其余的這些蛋白點:假定的蛋白質二硫鍵異構酶(putative protein disulfide isomerase),冠蛋白(coronin),熱休克蛋白60(Hsp60),丙酮酸激酶(pyruvate kinase)2個點斑點,谷氨酸脫氫酶(glutamate dehydrogenase, putativ),,蛋白激酶C受體1(receptor for activated C kinase 1),蘋果酸脫氫酶(malate dehydrogenase),尿苷磷酸化酶(uridine phosphorylase)2個斑點和過氧化氧化還原蛋白(peroxiredoxin)都具有免疫原性均為本研究新發(fā)現(xiàn)。 結論對所得到的16個陽性蛋白點進行分析,除SAG1(P30)和Hsp70外,其余9種具有免疫原性的抗原均為本研究新發(fā)現(xiàn)。這些免疫原性的蛋白點均非表面抗原或排泄-分泌抗原,而是存在于速殖子內(nèi)。此結果提示,弓形蟲速殖子內(nèi)存在一些尚未證實的免疫原性抗原,可能具有更強的保護性,有深入研究的必要性,可作為弓形蟲免疫診斷和疫苗研發(fā)新的候選分子。
【圖文】：

圖 2 STAg 雙向電泳圖譜Fig 2 2-DE map of T.gondii STAg3 免疫血清工作濃度的確定轉移至 PVDF 膜的 STAg 抗原與兔抗弓形蟲血清反應，可出現(xiàn)若干反應條帶。兔抗形蟲血清分別以 1:100、1:200、1:400、1:800 稀釋，顯色后，可見 1:200 的稀釋倍數(shù)相對它較好，所以選用 1:200 作為一抗的稀釋比例。而轉移至 PVDF 膜的 STAg 抗原與免疫兔血清反應時，未看見反應的條帶，，為了實驗的平行性，我們也選用 1:200 的稀釋比例為陰性對照（見圖 3）。

圖 3 免疫血清與弓形蟲 STAg 抗原免疫印跡反應Fig 3 Reactivity of anti-T.gondii sera with STAg antigens in Western bloE-Blot 結果究用兩塊膠做 Western blot，用兔抗弓形蟲血清檢測到的陽性蛋白點也用兔免疫前血清檢測得到。所以這 5 個蛋白點作為陰性得到的實際陽性蛋白點為 16 個。圖中虛線框內(nèi)的 5 個蛋白點 4）。
【學位授予單位】：山西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2008
【分類號】：R392

【參考文獻】

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2 何東茍;蛋白質組學研究及其在寄生蟲學上的應用[J];中國熱帶醫(yī)學;2003年04期

3 殷國榮;孟曉麗;張建紅;申金雁;劉紅麗;;STAg和霍亂毒素不同程序滴鼻免疫小鼠誘導抗弓形蟲作用[J];熱帶醫(yī)學雜志;2007年03期

4 張立勇,趙曉航,吳e

本文編號：2539777