【摘要】： 目的剛地弓形蟲是人和動(dòng)物感染率極高的一種機(jī)會(huì)致病原蟲,其中速殖子階段是主要的致病階段。速殖子的大規(guī)模全蛋白質(zhì)組學(xué)分析仍然還在進(jìn)行,但目前尚無(wú)弓形蟲的完全蛋白質(zhì)組圖。所以本研究應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)分析剛地弓形蟲可溶性速殖子抗原(soluble tachyzoite antigen,STAg)組分,尋找具有免疫原性的抗原,為弓形蟲疫苗有效候選抗原研究提供理論和實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 方法常規(guī)復(fù)蘇弓形蟲速殖子,腹腔接種BALB/c小鼠,轉(zhuǎn)種3次恢復(fù)其活力,收集腹腔沖洗液,純化,離心,上清液即為STAg,用三氯醋酸丙酮沉淀法制備2-DE樣品。STAg樣品,通過(guò)等電聚焦和SDS-PAGE電泳技術(shù)分離獲得弓形蟲STAg組分全蛋白點(diǎn),用兔抗弓形蟲血清和兔純血清(陰性對(duì)照)做免疫印跡獲得免疫原性的蛋白點(diǎn)。切取這些點(diǎn)、進(jìn)行膠內(nèi)酶解,ABI4700質(zhì)譜儀對(duì)蛋白點(diǎn)進(jìn)行鑒定分析。 結(jié)果2-DE凝膠圖顯示1227個(gè)蛋白斑點(diǎn),經(jīng)質(zhì)譜對(duì)其鑒定,得到230個(gè)弓形蟲蛋白點(diǎn),Western blot檢測(cè)顯示,16個(gè)蛋白點(diǎn)具有免疫原性。這些蛋白點(diǎn)中,主要表面抗原1(SAG1, 4個(gè)斑點(diǎn))曾有報(bào)道具有免疫原性,熱休克蛋白70(Hsp70)的免疫原性尚存在爭(zhēng)議,其余的這些蛋白點(diǎn):假定的蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶(putative protein disulfide isomerase),冠蛋白(coronin),熱休克蛋白60(Hsp60),丙酮酸激酶(pyruvate kinase)2個(gè)點(diǎn)斑點(diǎn),谷氨酸脫氫酶(glutamate dehydrogenase, putativ),,蛋白激酶C受體1(receptor for activated C kinase 1),蘋果酸脫氫酶(malate dehydrogenase),尿苷磷酸化酶(uridine phosphorylase)2個(gè)斑點(diǎn)和過(guò)氧化氧化還原蛋白(peroxiredoxin)都具有免疫原性均為本研究新發(fā)現(xiàn)。 結(jié)論對(duì)所得到的16個(gè)陽(yáng)性蛋白點(diǎn)進(jìn)行分析,除SAG1(P30)和Hsp70外,其余9種具有免疫原性的抗原均為本研究新發(fā)現(xiàn)。這些免疫原性的蛋白點(diǎn)均非表面抗原或排泄-分泌抗原,而是存在于速殖子內(nèi)。此結(jié)果提示,弓形蟲速殖子內(nèi)存在一些尚未證實(shí)的免疫原性抗原,可能具有更強(qiáng)的保護(hù)性,有深入研究的必要性,可作為弓形蟲免疫診斷和疫苗研發(fā)新的候選分子。
【圖文】：

圖 2 STAg 雙向電泳圖譜Fig 2 2-DE map of T.gondii STAg3 免疫血清工作濃度的確定轉(zhuǎn)移至 PVDF 膜的 STAg 抗原與兔抗弓形蟲血清反應(yīng)，可出現(xiàn)若干反應(yīng)條帶。兔抗形蟲血清分別以 1:100、1:200、1:400、1:800 稀釋，顯色后，可見(jiàn) 1:200 的稀釋倍數(shù)相對(duì)它較好，所以選用 1:200 作為一抗的稀釋比例。而轉(zhuǎn)移至 PVDF 膜的 STAg 抗原與免疫兔血清反應(yīng)時(shí)，未看見(jiàn)反應(yīng)的條帶，，為了實(shí)驗(yàn)的平行性，我們也選用 1:200 的稀釋比例為陰性對(duì)照（見(jiàn)圖 3）。

圖 3 免疫血清與弓形蟲 STAg 抗原免疫印跡反應(yīng)Fig 3 Reactivity of anti-T.gondii sera with STAg antigens in Western bloE-Blot 結(jié)果究用兩塊膠做 Western blot，用兔抗弓形蟲血清檢測(cè)到的陽(yáng)性蛋白點(diǎn)也用兔免疫前血清檢測(cè)得到。所以這 5 個(gè)蛋白點(diǎn)作為陰性得到的實(shí)際陽(yáng)性蛋白點(diǎn)為 16 個(gè)。圖中虛線框內(nèi)的 5 個(gè)蛋白點(diǎn) 4）。
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號(hào)】：R392

【參考文獻(xiàn)】

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4 張立勇,趙曉航,吳e

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