【摘要】：近年,日本群馬(Gunma)大學(xué)森昌朋(Oh-IS)教授的研究小組發(fā)現(xiàn)一種新的厭食肽??Nesfatin-1,它是核組蛋白2(nucleobindin2 NUCB2)裂解后的產(chǎn)物。NUCB2蛋白的氨基酸序列在人、大鼠和小鼠是高度同源的(分別為95%和87.4%),在前激素酶(prohormone convertases, PC)的作用下它可以裂解成三個片段:nesfatin-1(1-82殘基)、nesfatin-2(85-163殘基)和nesfatin-3(166-396殘基)。采用nesfatin-1的特異性抗體(nesfatin-Ab24)行免疫組化分析研究顯示nesfatin-1存在于中樞眾多與攝食調(diào)節(jié)密切相關(guān)的核團上,包括下丘腦的弓狀核( arcuate nucleus, ARC ),視上核( supraoptic nucleus, SON ),室旁核(paraventricular nucles, PVN),下丘腦外側(cè)區(qū)(lateral hypothalamic area, LHA)及腦干的迷走神經(jīng)背核(dorsal motor nucleus of the vagus, DMV),孤束核(nucleus tractus solitarius, NTS),動眼神經(jīng)副交感核(Edinger-Westphal nucleus, EW)和尾脊核中。側(cè)腦室注射(intracerebroventricular, icv)nesfatin-1后可劑量依賴性的抑制自由飲食大鼠的夜間攝食量以及減少其體重增長,而經(jīng)側(cè)腦室注射NUCB2的其他片段如nesfatin-2、nesfatin2/3或nesfatin-3的大鼠均未見到攝食抑制。但經(jīng)側(cè)腦室注射nesfatin-1的特異性中和抗體nesfatin-Ab24后大鼠的攝食量明顯增加。這些研究結(jié)果顯示了nesfatin-1在中樞攝食調(diào)節(jié)中具有重要的作用。 眾所周知,大多數(shù)攝食調(diào)節(jié)分子不僅存在于中樞,而且在外周也常有分布,特別是消化系統(tǒng)中,如我們熟知的膽囊收縮素(cholecystokinin, CCK)、葛林素(ghrelin)、胰高血糖素樣肽-1(glucagons-like peptide-1, GLP-1)等。已有研究發(fā)現(xiàn)外周脂肪組織也有NUCB2 mRNA的表達,還有兩個研究小組研究證實nesfatin-1是可以自由通過血腦屏障的,外周注射nesfatin-1也可以劑量依賴性的抑制實驗動物的攝食量,提示nesfatin-1可能也存在于外周。因此,本次研究我們對nesfatin-1在人、大鼠及小鼠消化系統(tǒng)的表達情況進行系統(tǒng)探討,以為進一步研究nesfatin-1在消化系統(tǒng)的功能提供形態(tài)學(xué)依據(jù)。 【目的】 1.探討nesfatin-1在人、大鼠及小鼠消化系統(tǒng)不同部位的表達。 2.探討nesfatin-1免疫陽性細(xì)胞的種類。 3.探討NUCB2蛋白及NUCB2 mRNA在消化系統(tǒng)各組織中的不同含量。 【方法】 1. SD大鼠及ICR小鼠的飼養(yǎng):成年雄性SD大鼠(220-250g)及ICR小鼠(22-25g)各6只均購自南京醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心,在(12:12h明/暗循環(huán),燈亮/滅:06h/18h),濕度60%,溫度(22±2℃)的SPF環(huán)境中3只/籠飼養(yǎng)。 2.上述大小鼠飼養(yǎng)一周后,禁食12小時,分別于早晨9點腹腔注射10%水合氯醛(0.35ml/100g)麻醉后處死動物,留取所有SD大鼠及ICR小鼠胰腺、胃、十二指腸、食管、肝、小腸及大腸7處組織。取部分組織塊進行包蠟,其余部分迅速放入-80℃冰箱保存。免疫組化檢測nesfatin-1在上述7處消化系統(tǒng)組織的表達,HE檢測nesfatin-1免疫陽性細(xì)胞的種類,Western-blot檢測各組織中NUCB2蛋白的含量,RT-PCR檢測各組織中NUCB2 mRNA的含量。 3.人消化系統(tǒng)組織留取自南京醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院手術(shù)室20例因消化系統(tǒng)疾病而行外科手術(shù)治療的患者(男12人,女8人,平均年齡52±10歲,表1)。惡性腫瘤患者的組織取自距腫瘤組織5cm以外的非癌性組織,良性病變患者的組織取自病變切緣旁。同樣留取胰腺、胃、十二指腸、食管、肝、小腸及大腸7處組織,取部分組織塊進行包蠟,其余部分迅速放入-80℃冰箱保存。免疫組化檢測nesfatin-1在上述7處消化系統(tǒng)組織的表達,HE檢測nesfatin-1免疫陽性細(xì)胞的種類,Western-blot檢測各組織中NUCB2蛋白的含量,RT-PCR檢測各組織中NUCB2 mRNA含量。 【結(jié)果】 1.免疫組化染色顯示,nesfatin-1在人、SD大鼠及ICR小鼠三種動物消化系統(tǒng)有相似的表達部位,僅存在于胰腺胰島的中央、胃下1/3到1/2之間的黏膜腺及十二指腸黏膜下層的腺體中,而在食管、肝、小腸和大腸中均沒有檢測到這種物質(zhì)的存在。 2. HE染色觀察顯示,位于胰島中央的nesfatin-1免疫陽性細(xì)胞類似于分泌胰島素的β細(xì)胞,胃黏膜腺的nesfatin-1免疫陽性細(xì)胞類似于內(nèi)分泌細(xì)胞,十二指腸黏膜下層的nesfatin-1免疫陽性細(xì)胞類似于布氏腺。 3. Western免疫印跡檢測發(fā)現(xiàn)在這三種動物消化系統(tǒng)所取7處組織中均只檢測到了代表NUCB2蛋白的約50kDa的條帶,而代表nesfatin-1的約9.7kDa左右的條帶均沒檢測到。對這七個部位的NUCB2蛋白相對含量分別進行兩兩比較,結(jié)果顯示胰腺、胃、十二指腸中的蛋白量較食管、肝、小腸及大腸的高,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p=0.000)。 4.對人及SD大鼠消化系統(tǒng)所取7處組織行RT-PCR檢測發(fā)現(xiàn),所有組織中均檢測到了NUCB2 mRNA的表達,但胰腺、胃、十二指腸中的mRNA相對量較食管、肝、小腸及大腸的高,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.01)。 【結(jié)論】 上述結(jié)果提示,nesfatin-1不僅是一個中樞攝食調(diào)節(jié)肽,而且廣泛的存在于外周消化系統(tǒng)的胰腺、胃及十二指腸中,這些部位是外周參與攝食調(diào)節(jié)與能量代謝平衡的重要部位,提示nesfatin-1在碳水化合物代謝、胃腸功能及營養(yǎng)吸收調(diào)節(jié)方面可能有一定作用。
【圖文】：

南京醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文是管狀復(fù)合腺，常有分枝，直接開口在十二指腸腸腔或開口在隱窩，類似于十二指腸特有的十二指腸腺即布氏腺(Brunner′s gland) （圖1 G-I）。⑷ 但是，人食管（圖2 A-C）、肝（圖2 D-F）、小腸（圖2 G-I）及大腸中均未檢測到nesfatin-1的表達（圖2 J-L）。

圖 2. 人食管、肝、小腸及大腸中均無 nesfatin-1 的表達注：A-C 食管，，D-F肝，G-I小腸，J-L大腸（IHC×10、HE×10、HE×40）。2. 在SD大鼠的消化系統(tǒng)，免疫組化研究在胰腺、胃及十二指腸中也檢測到有大量的nesfatin-1的表達。⑴ Nesfatin-1在胰腺中主要存在于胰島的中央，這些免疫陽性細(xì)胞類似于分泌胰島素的β細(xì)胞（圖3A-C）。⑵ 在胃中nesfatin-1主要存在于下1/3到1/2之間的黏膜腺中，這些免疫陽性細(xì)胞18
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2010
【分類號】：R346

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 Yutaka Oomura;;Expression of nesfatin-1/NUCB2 in rodent digestive system[J];World Journal of Gastroenterology;2010年14期

本文編號：2534204